流式细胞实验结果图
“OBIS激光器支持我们工作所需的快速直接数字调制，而且添加和移除这些即插即用激光器非常容易，它们都具有相同的形式和适用性。它们提供了丰富的数据。”--Jessica Houston，美国新墨西哥州拉斯克鲁塞斯市新墨西哥州立大学化学与材料工程系教授。
挑战
新墨西哥州立大学Jessica Houston教授的研究小组研究了在流式细胞术中使用时间分辨测量的独特方法。该小组关注的一个重要领域是在化疗药物存在的情况下，使用荧光寿命测量法对癌症细胞进行代谢图谱绘制，评估其活力。另一个关键应用靶向基本细胞信号传导和受体活性，使用Förster(荧光)共振能量转移(FRET)和荧光蛋白。
Houston指出，时间分辨流式细胞术与大多数现有的流式细胞仪应用程序明显不同，后者依赖稳态荧光强度数据来执行计数和分选功能。商业上可买到的针对稳态数据优化的流式细胞仪不适合她的研究。因此，作为第一步，她的团队必须建立自己的流式细胞仪。
有两种众所周知的测量荧光寿命的方法：在时域中使用脉冲激光或其他光源，或者在频域中。Houston解释说，“我们需要一台高通量流式细胞仪来对大量细胞进行无损计数和/或分类，例如，用于研究血液中的转移性癌症细胞。而使用光子计数的时域测量无法支持必要的吞吐量。因此，我们决定在频域工作，在频域中，既定的方法是对细胞的兴奋性在激光上，并关联调制荧光发射中观察到的相移。”
图1时间分辨流式细胞仪的关键元件
图2组装时间分辨流式细胞仪
解决方案
休斯顿小组希望在他们的工作中除了研究NADH和FAD等代谢物的内源性荧光外，还能够使用许多不同的荧光团。因此，他们需要多种激光波长来有效地激发所有这些不同的目标。他们还需要在光束指向和功率噪声方面具有良好模式质量(即低M2)以及高稳定性输出的激光器。
经过仔细评估，他们决定使用Coherent的OBIS激光器。Houston指出：“我们目前有几种波长包括375 nm、405 nm、488 nm和633 nm的OBIS激光器。这些智能激光器非常适合我们的工作。除了高质量的输出外，它们还支持我们工作所需的快速直接数字调制，加上添加和移除这些形状和尺寸相同的即插即用激光器非常容易。”。“她指出，10瓦甚至100瓦的可用性是OBIS的另一个重要功能。这是因为她的许多实验都是基于频域寿命测量的，其中数字调制基本上将流动池的激光功率降低了50%
结果
休斯顿表示，她定制的流式细胞仪和越来越多的OBIS激光已被证明是一个成功的组合，并已为她的代谢谱研究和FRET工作提供了大量数据。
对于代谢谱，她引用了NADH的例子，其中测量的荧光寿命取决于该代谢物在被评估的细胞中主要处于结合状态还是未结合状态。这与细胞如何产生ATP有关，ATP是一种为大多数细胞活动提供能量的分子。正常细胞的代谢活性主要依赖线粒体氧化磷酸化(OXPHOS)来产生ATP。但在许多类型的癌细胞中，糖酵解在ATP的产生中发挥着更大的作用，OXPHOS的能力降低。因此，休斯顿研究小组可以使用NADH寿命作为细胞对新治疗反应的定量指标。
该小组还使用该系统快速获取定量FRET数据。他们正在分析这些数据，以更好地了解蛋白质-蛋白质的相互作用，进行蛋白质构象研究，并探索酶的作用。休斯顿指出，“我们可以观察供体荧光团是否处于猝灭状态。我们还可以捕捉供体发射和受体发射。同样，这些数据可以表明癌症治疗的有效性。总而言之，OBIS激光器和我们的高通量细胞仪确实提供了丰富的数据。”
童贺和3260流式细胞仪检测图怎么看flowjo -
习康厕17051187917 ______ Flowjo可以读取FCS格式的文件,一般的流式细胞仪都产生这个格式的文件.把FCS文件导入Flowjo后,双击导入的文件,默认打开的是FSC,SSC 点状图,你可以根据具体的使用更换坐标,或者设定gate
童贺和3260流式细胞术的图片看不懂 -
习康厕17051187917 ______ 这应该是流式里最简单的图了吧,是不是通过FOXP3抗体分选调节性T细胞的?直接问帮你检测的仪器工程师就好了啊.横坐标是信号强度,纵坐标是细胞数量,中间那个H框是人为限定的一个取值范围,也就是阳性细胞.图示中设置的值是接近10^3,大于这个值被视为阳性细胞.
童贺和3260流式细胞仪的FSC,SSC图,侧向发散和向前发散分别代表什么意思请问流式细胞仪的图侧向发散是代表胞内物质发生改变吗? 是不是对细胞有害呢? -
习康厕17051187917 ______[答案] SSC增加,这个只能说是细胞内的折光性物质增加,并不一定就是有害的,也可能是有益的. FSC增加,说明细胞的体积增大
童贺和3260流式细胞仪可根据细胞中DNA含量的不同对细胞分别计数.研究者用某抗癌物处理体外培养的癌细胞.24小时后用流式细胞仪检测,结果如图.对检测结果的分析... -
习康厕17051187917 ______[选项] A. a峰中细胞的数量是b峰细胞数量的2倍 B. a峰和b峰之间的细胞正进行DNA复制 C. 处于分裂期的细胞均被计数在a峰中 D. 癌细胞对此抗癌药物不敏感
童贺和3260流式细胞fl2 - a和fl2 - w是什么意思 -
习康厕17051187917 ______ 信号检测时,每一个细胞通过激光,机器的探头都会检测到一个荧光信号,在内部产生一个电脉冲信号(波),这个信号机器记录为一个峰值,每一个峰值都有三个参数,高度(H),宽度(W)和曲线下面积(A),H 和W都是直接测出的,而A是根据机器的设置就算得出.这三个参数都可以作为流式细胞仪结果图的坐标.比如PI(FL-2,老式的机器用这个来表示荧光通道的数目,一般是1-4)的信号,既可以用PI-H来作图,也可以用PI-A来作图,而W则一般是用作区分单细胞的.因为如果多于一个以上的细胞粘附在一起通过激光,就会导致时间变长,W增加.
童贺和3260如何根据流式细胞仪出的检测图判断细胞类型 -
习康厕17051187917 ______ 这个问题问的太大了.时间情况是很复杂的.举个例子.如果是去红细胞的外周血白细胞.在FSC-SSC散点图上,不用染色就可以区分淋巴细胞,单核细胞和粒细胞.而其他的细胞类型,是必须吐过特异性的标志物染色才能确定的.
童贺和3260流式细胞仪分析shrna效率结果怎么看 -
习康厕17051187917 ______ shRNA的效果一般是测目标基因的表达量. 1. 先用iso-type control,也就是非特异性的同型抗体染的细胞测,设好了阴性的阈值. 2. 再用特异性抗体测用对照序列shRNA转染的细胞,看阳性细胞的比率 3. 再测用shRNA转染的实验组的细胞,看阳性细胞的比率. 4. 最后对比2和3的阳性细胞的比率有无变化.如果有明显减低,说明shRNA有效.变化的百分率就是shRNA的效率 5. 如果阳性比例没有明显变化,但是细胞的荧光强度有偏移,就比较阳性细胞荧光强度的median,或者mean
童贺和3260如何分析流式细胞仪显示的数据
习康厕17051187917 ______ (一)单参数直方图 单参数直方图是一维数据用得最多的图形显示形式,既可用于定性分析,又可用于定量分析,形同一般X-Y平面描图仪给出的曲线.根据选择放大器类型不同,横坐标可以是线性标度或对数标度.用＂信道＂来表示,实质上...
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习康厕17051187917 ______[选项] A. b峰中细胞的DNA 含量是a峰中的2倍 B. a峰和b峰之间的细胞正进行DNA复制 C. 处于分裂期的细胞均被计数在a峰中 D. 此抗癌药物抑制了癌细胞DNA的复制
童贺和3260流式细胞仪检测淋巴细胞因子时抗体怎么加 -
习康厕17051187917 ______ 流式检测细胞因子,有两种做法:第一种是检测细胞内的,需要固定和通透细胞膜,然后加抗体染色,在洗去未结合的抗体 另外一种是荧光小珠为基础的,检测溶液内细胞因子.可以同时检测一个系列.小珠按照荧光种类和强弱的不同,表面事先固定好了相应的抗体.和样本混合后,在加入另外一种荧光标记的抗体.结果看起来就是下面这个图: