质粒提取实验报告结论

磁珠质粒提取试剂盒

产品简介：

采用优化的 SDS-碱裂解法裂解细胞，高效去除抑制物等杂质，羟基磁珠能在高盐、低 pH

值状态下与溶液中的核酸通过疏水作用、氢键作用和静电作用等发生特异性结合，而不与其

他杂质（蛋白质）结合，迅速从样品中分离质粒 DNA。纯化的质粒 DNA 可直接用于酶切、

PCR、测序、连接、转化、转染一些常规的传代细胞等生物学实验。

产品内容：

储存条件：

RNase A，-30 ~ -15 ℃保存，干冰运输；

羟基磁珠 2 ~ 8 ℃保存，室温运输；

其他组分 15 ~ 25 ℃保存，室温运输。

使用步骤：

1、取 5-10 mL 过夜培养菌液加入离心管中，12000 rpm 离心 2 min 收集菌体沉淀，尽量吸弃

上清。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入 250 μL Buffer P1（已加入 RNase A），使用移液枪或涡

旋振荡器充分混匀，悬浮菌体沉淀，确保无菌块。37 ℃静置 15 min，以除去 RNA。

3、向离心管中加入 250 μL Buffer P2，温和上下颠倒混匀 4-6 次，充分混匀使菌体裂解，此

时溶液应变得清亮粘稠。

注意：温和地混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组 DNA。所用时间不应超过 5 min，以免质粒受到破坏。

4、向离心管中加入 350 μL Buffer P3，立即温和上下颠倒混匀 8-10 次，充分混匀，此时应

出现白色絮状沉淀，12000 rpm 离心 10 min。

注意：P3 加入后立即混合，避免产生局部沉淀。如果离心完仍有沉淀漂浮，可延长离心时间取上清。

5、将步骤 4 中的上清液转移到新的 2 mL 灭菌离心管中，加入等体积异丙醇，混匀，加入50 μL 羟基磁珠，颠倒混匀 1 min，室温放置 2 min。

6、将步骤 5 中的离心管放在磁力架上静置，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。

7、将离心管从将离心管从磁力架上取下，加入 600 μL Buffer PW（请确认是否加入无水乙

醇），混匀 2 min。

注意：加入漂洗液 PW 后，室温静置 2 min，有助于更好的去除杂质。

8、将离心管放置于磁力架上静置，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。

9、将离心管从磁力架上取下，加入 600 μL Buffer PW，混匀 2 min。

10、将离心管放置于磁力架上静置，磁珠完全吸附后，弃废液，吸尽管底管盖的液体。

11、将离心管置于磁力架上，室温晾干 15 min。

注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间，以免难

以洗脱质粒 DNA。

12、将离心管从磁力架上取下，加入 100-200 μL 洗脱缓冲液 TB 或 ddH2O（洗脱液可在水浴

锅中预热），振荡混匀，置于 56 ℃水浴锅中，孵育 10 min，期间每隔 2 min 颠倒混匀。

13、将离心管放置于磁力架上，磁珠完全吸附后，小心将质粒 DNA 溶液转移至一个新离心

管中，并于-20℃保存。

注意事项：

1、使用前请短暂离心 RNase A，将试剂盒提供的 RNase A 溶液全部加入 Buffer P1 中，置于

4℃保存。

2、羟基磁珠置于 4℃保存，振荡混匀后再使用。

3、首次使用前按 Buffer PW 瓶子标签所示，加入适量的无水乙醇稀释 Buffer PW，于室温保

存。

4、若低温保存时，Buffer P2 和 Buffer P3 溶液容易产生白色沉淀，使用前可室温放置一段时

间，必要时可在 37℃水浴锅中预热至沉淀完全溶解，混匀后再使用。

5、处理低拷贝质粒时，提高菌液的用量，并按比例扩大 Buffer P1、Buffer P2 和 Buffer P3

的用量。

6、使用 Buffer P2、Buffer P3 和 Buffer PD 应戴手套，使用后应立即盖紧盖子。

7、自备试剂：异丙醇、乙醇。

叔以菡4389滤纸上质粒如何提取,实验要用,比如说像用多少TE缓冲液,时间,还要不要离心啊,还有的是我见有的人是说要在泡四个小时,我真心不知道哪个是真确的. -
支栏莲15081019985 ______[答案] 质粒可以用灭菌的DDH2O或者TE buffer溶解,一般溶解四小时应该足够了,不放心的话可以4度过夜,可以用圆圈的四分之一或者二分之一溶解在50-100ul上述溶液中,4度过夜后,10000g离心一分钟,取上清10ul转化至DH5α细胞内即可.

叔以菡4389DNA电泳图结果分析以上是我实验的电泳结果,一共做了三个试验,最后一起跑的电泳,从边开始,第一个是mark,第二个是质粒DNA的提取,第三个是... -
支栏莲15081019985 ______[答案] 首先看第二泳道,能够看见两条带,一般的质粒跑完电泳都是这种情况,因为质粒容易开链,变成线性的,或者是半线性半环状,而环状的比线性的跑的快,所以上面那条浅的应该是开链的质粒,下面的是环状的质粒,不过不要紧,一般都...

叔以菡4389质粒的提取方法是什么?
支栏莲15081019985 ______ 8、取上清液,加入50mlRNA酶A(10mg/ml),37℃水浴20分钟

叔以菡4389怎样得到高纯度的DNA?大肠杆菌质粒碱法抽提实验中,为了得到高纯度的DNA,可采取哪些措施? -
支栏莲15081019985 ______[答案] 很难呀,过下层析柱吧.过程中用到NACL了,要用75%酒精多洗下.这个质粒碱法抽提过程中分子克隆书上没提到加RNA酶,建议加点会更好

叔以菡4389在碱裂解法提取质粒DNA实验中,RNA酶可以不加入Ⅰ液,而在最后加入质粒溶液吗?如何获得更多的超螺旋质粒? -
支栏莲15081019985 ______[答案] 若无特殊考虑,Rnase加入到Buffer 1,并低温保存是最好的.在最终收获的质粒中加入,会带来RNAase的污染,并会有寡核苷酸的带入,并可能降低你质粒的得率,你需要考虑是否对你后续实验有影响(是否还要去RNAase?).另一种情...

叔以菡4389在DNA质粒提取实验中各种试剂的作用buffer P1 、buffer P2、bufferP3、buffer WA、buffer WB、TE 各自的作用... -
支栏莲15081019985 ______[答案] 以东盛生物的为例 buffer P1:除去RNA buffer P2:裂解细胞 buffer P3:沉淀DNA buffer WA、buffer WB:都是洗涤液(这两个之间有什么区别我也不清楚) TE:溶解DNA.

叔以菡4389分子实验报告根据本实验认为影响转化率的因素有哪些 -
支栏莲15081019985 ______ ⑴、受体细胞 转化的受体细胞一般是限制-修饰系统缺陷的突变株,即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株,它可容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代. ...

叔以菡4389高中化学必修一萃取实验报告怎么写????? -
支栏莲15081019985 ______ 1、实验目的 2、实验原理 3、实验器材和药品 4、实验步骤 5、实验现象 6、实验结论 实验目的就是探究萃取现象 实验原理是溶质在不同的溶剂中溶解度不同,在两种互不相溶的溶剂中溶质会由溶解度小的溶剂向溶解度大的溶剂转移,故会发生萃取现象 实验器材一定有分液漏斗(梨形分液漏斗)、铁架台(带铁圈),药品一般是溴水或者碘水,还有苯或者四氯化碳,这个要根据实验的实际要求决定 步骤就是你们书上的步骤 现象就是分层,有机层显色,水层几乎无色或者颜色变浅,要根据萃取的程度确定 实验结论就是你的实验目的,还有像“碘在四氯化碳中的溶解度比在水中的大”这样的结论

叔以菡4389粗盐的提纯及纯度检验实验预习报告,怎么完成? -
支栏莲15081019985 ______ 一、实验目的 1、掌握提纯粗食盐的原理、方法及有关离子的鉴定. 2. 掌握溶解、过滤、蒸发、浓缩、结晶、干燥等基本操作. 3. 学会台秤、量筒、pH试纸、滴管和试管的正确使用方法. 二、实验原理 粗食盐通常是从盐湖等地方采得,其中含...