hepg2细胞会感染人

在2023年欧洲肝脏年会上（EASL2023），研究人员描述了临床阶段的生物技术公司（Precision BioSciences）研发的慢乙肝基因编辑疗法的最新临床前开发数据。

该临床前研究指，慢性乙型肝炎基因编辑方法：用序列特异性ARCUS核酸酶靶向cccDNA和整合的病毒基因组，在体内清除乙型肝炎病毒。ARCUS核酸酶可用于识别乙型肝炎病毒（HBV）基因组中的保守DNA序列，并为慢性乙型肝炎（CHB）治疗提供一种策略。

CHB的持续存在归因于肝内病毒共价闭合环状DNA（cccDNA）池的维持及整合后HBV的免疫抑制性乙肝表面抗原（HBsAg）的表达。目前疗法对cccDNA或整合病毒的HBsAg的表达没有直接影响。在肝细胞中表达的ARCUS核酸酶可同时切割cccDNA和整合的病毒基因组，从而去除cccDNA并抑制病毒基因的表达。

本届欧肝会上，研究人员描述了一种潜在治疗CHB方法，该方法使用一种高度特异性工程化ARCUS核酸酶（ARCUS- POL）靶向HBV基因组。通过反复几轮的蛋白工程，ARCUS-POL核酸酶被优化为具有高水平的靶向编辑能力及最小的脱靶活性。

然后在感染了HBV的原代人肝细胞（PHHs）和整合了部分HBV基因组的HepG2细胞系中进行了体外药效和特异性测试。为了在体内评估ARCUS-POL，开发了新型外显子腺相关病毒(AAV)小鼠和非人灵长类动物(NHP)模型，其中含有作为cccDNA替代物的部分HBV基因组。通过全身给药含有ARCUS-POL mRNA的脂质纳米颗粒（LNPs）实现了临床相关递送。

ARCUS基因编辑使cccDNA和整合的HBV失活以驱动持久的抗原丢失，来源EASL2023、Precision Bio

结果表明，将ARCUS-POL mRNA转染到HBV感染的PHHs中，可使cccDNA和HBsAg减少75%以上。重要的是，ARCUS-POL在PHHs中没有产生可检测到的易位，使用杂交捕获后进行长读测序。将ARCUS-POL瞬时递送至含有整合HBV DNA的细胞后，实现了靶向编辑率>80%，随后HBsAg降低。在小鼠和NHP AAV模型中，LNP递送ARCUS-POL mRNA后，观察到AAV总拷贝数显著减少，on-target在靶率很高。在支持HBsAg表达的小鼠模型中，循环表面抗原持久减少了96%。

研究结论：RCUS-Pol核酸酶能够消除cccDNA并降低整合HBV的HBsAg表达，而不会诱导易位。这些数据支持一种潜在的基因编辑方法和治愈CHB。

小番健康结语：以上是在本届欧洲肝脏大会上，研究人员介绍了使用在研乙肝新药PBGENE-HBV，在临床前开发的最新进展，即对乙肝血清抗原及cccDNA的抗病毒活性均很高，且持续下降的积极数据，支持PBGENE-HBV的继续开发和提交CTA/IND申请。

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