上下游引物怎么选择

薛芬秆1823如何用oligo6评价引物 -
郜追依19295517637 ______ 你要自己先粗略看一下引物设计的是否合乎基本的一些原则,然后再用软件评价.怎么样确定上下游引物和编辑引物不用我多说吧,我就从第三个标签“analyze＂说起吧. 1、duplex formation:这是评价引物二聚体形成的,包括自身形成二聚...

薛芬秆1823怎样根据mRNA设计引物?
郜追依19295517637 ______ mRNA序列和cDNA序列基本一致,只是T、U的对应.引物设计是根据cDNA的两端序列,上游引物与cDNA的5'端相同,下游引物与cDNA的3'反向互补序列相同,即与cDNA的互补序列的5'端相同.cDNA的序列你在pubmed的网站可以找到(CDs那一项).具体几个碱基,一般是15~18个就差不多了,尽量保证上下游引物的GC含量一致.这样PCR的时候,引物结合的效率是一致的,PCR成功的几率更高.另外,如果要做克隆质粒的实验,当然需要加入酶切序列啦!酶切位点的选择也有几点要注意的,你需要的话我再详细说啊!

薛芬秆1823引物上下游退火温度相差太多,如何选择退火温度呢?比如satt427的上游温度为65.15,而下游为57.26.而且引物是的退火温度是不是上下游的温度的平均值... -
郜追依19295517637 ______[答案] 你设计的引物退火温度相差并不是太多的啊,我们一般将上下游引物退火温度平均值加2度作为退火温度,如果你不放心可以做个梯度PCR,一般可以筛选出相对较好的退火温度.如果还是没P出来可以用TouchDown PCR试试

薛芬秆1823什么是上、下游引物,什么是5'端引物和3'端引物?上下游引物是不是相对的?双链DNA的每一条链都有5'和3'端,那5'和3'端引物是怎么区分的? -
郜追依19295517637 ______[答案] 四种核苷酸或脱氧核苷酸按照一定的排列顺序以3',5'磷酸二酯键(phosphodiester linkage)相连形成的多聚核苷酸链或... DNA双链是反向的,复制时,两股链均作为模板,但新链的合成只能是5'→3' 引物提供3'-OH,与原料dNTP的5'-P形成...

薛芬秆1823引物设计区域选择问题.我设计兼并引物.多序列比对发现三个保守区.一个在中上游,一个在中游,一个在下游.有经验的朋友能告诉我我该选哪个保守区设计引... -
郜追依19295517637 ______[答案] 都可以,你可以都设计都合成了,反正便宜 不过,要blast看这三个保守区在基因组中有没有其他相似序列,以防非特异

薛芬秆1823怎样设计RT PCR引物 -
郜追依19295517637 ______ Oligo dt不需要设计,用试剂盒里面的就行.如果你RT的引物想用自己的,那你需要扩增的基因序列应该是明确的吧.RT的时候'引物没太多的选择性,mRNA序列跟反义链配对,因此RT的引物要根据正义链 (就是通常描述基因序列的那条链)...

薛芬秆1823如何使用新版BLAST验证引物特异性 -
郜追依19295517637 ______ 1、进入Blast网页 2、点击Search for short, nearly exact matches 3、 在search栏中输入引物系列: 注:文献报道ABCG2的引物为5'-CTGAGATCCTGAGCCTTTGG-3' 5'-TGCCCATCACAACATCATCT-3' (1)输入方法可先输入上游引物,...

薛芬秆1823上游引物用英文怎么说引物 - R引物 - F哪个是上游的哪个是下游的啊? -
郜追依19295517637 ______[答案] 上游引物:Forward primer,F-引物,又称为正向引物; 下游引物:Reverse primer,R-引物,又称为反向引物.

薛芬秆1823通用引物是一只EP管中包含了上游引物和下游引物了,还是也是分开的,分开的搭配的话要怎么搭配 -
郜追依19295517637 ______ 合成引物的话,一管一条引物,按照合成单上的OD值+mo,加水(一般都给出了体积)配成10umol,两管的浓度是一样的,PCR时50ul各加1ul就可以了.

薛芬秆1823如何看一个引物设计的好坏 -
郜追依19295517637 ______ 通过引物的参数检测 引物设计参数: a 引物长度一般在20bp左右,上下游引物碱基长度不要相差超过4个碱基. b 引物退火温度一般在58度,不同软件TM使用不同的算法,primer3,primer 5,primer 6,primer express等一般可以设置在55-58度,...