敲低质粒构建原理

慕维弘2866条件性敲除的原理是什么? -
云江临13142793829 ______ Cre-LoxP条件性敲除的原理:Cre-LoxP系统是源于P1噬菌体的一个DNA重组体系,由Cre酶和相应的LoxP位点组成,它能导致重组发生在特定的DNA序列处(LoxP位点),该系统可以将外源基因定点整合到染色体上或将特定DNA片段删除. ...

慕维弘2866怎样来构建一种新的质粒载体! -
云江临13142793829 ______ 1、有多个限制酶切点,而且每种酶的切点最好只有一个,可适于多种限制酶切割的DNA插入 2、含有复制起始位点,能够独立复制;通过复制进行基因扩增,否则可能会使重组DNA丢失 3、有一定的标记基因,便于进行筛选. 4、载体DNA分子大小应合适,以便操作. 利用一个已知载体的框架,把酶切位点,启动子,终止子位点,标记基因片段分别插入,就可以构建一个简单的载体了.

慕维弘2866有谁做过基因敲出细胞系吗 -
云江临13142793829 ______ 基因敲出质粒转染可以构建稳定细胞株 一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.脂质体转染:在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样...

慕维弘2866生物化学实验中制备质粒DNA方法中,酚氯仿裂解法的实验原理 -
云江临13142793829 ______ 质粒DNA的制备 【实验目的】 1.了解质粒的特性及其在分子生物学研究中的作用; 2.掌握质粒DNA分离和纯化的原理; 3.学习碱裂解法和煮沸法分离质粒DNA的方法. 【实验原理】 质粒是细菌内的共生型遗传因子,它能在细菌中垂直遗传并...

慕维弘2866为什么构建基因文库 -
云江临13142793829 ______ (1). 质粒文库 质粒是最早用于基因克隆的载体.现已有各种适用于不同工作的如克隆、表达、测序等专用商品质粒.但在构建基因文库上,由于质粒相对较小并只能容纳比自身更小的片段,因此它不能用于构建核基因组文库,通常只用来构建短...

慕维弘2866如何将外源基因导入植物细胞并表达 -
云江临13142793829 ______ 1、介导转化法 农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌,它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位,并诱导产生冠瘿瘤或发状根.根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒,其上有一段T-DNA,...

慕维弘2866对天然质粒的人工构建改造通常需要对质粒哪些方面进行操作改进
云江临13142793829 ______ 修改 ORI (复制起始位点) 添加抗生素抗性基因 添加 MCS (多克隆位点)区域 敲除转座子 敲除不用的蛋白编码段

慕维弘2866...请回答相关问题:(1)限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定___,并且使特定部位的两个脱氧核苷酸之间的___键断开.(2)构建重组质粒时,常用Ti... -
云江临13142793829 ______[答案] (1)限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列(或者碱基序列),并且使特定部位的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键断开. (2)构建重组质粒时,常用Ti质粒作为载体,是因为Ti质粒上具有T-DNA,它能把目的基因整合到受体细胞染色体...

慕维弘2866质粒的提取原理 -
云江临13142793829 ______ 质粒提取是指去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒. 目录 一、质粒提取原理 质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA,是进行DNA重组的常用载体.作为一个具有自身复制起点的复制单位...

慕维弘2866简述质粒授予宿主细胞抗性的4种机制 -
云江临13142793829 ______ 质粒是真核细胞细胞核外或原核生物拟核区外能够进行自主复制的遗传单 位,包括真核生物的细胞器(主要指线粒体和叶绿体)中和细菌细胞拟核 区以外的环状脱氧核糖核酸(DNA)分子.现在习惯上用来专指细菌(大肠杆 菌)、酵母菌和放...