细胞凋亡和坏死
细胞凋亡检测可以：（1）用于肿瘤细胞和组织在内的不同种类病理标本研究；（2）应用 于临床诊疗，新药研制、生物制品开发、肿瘤放化疗、以及从促凋亡角度探索肿瘤的基因治 疗；（3）对相关疾病的早期发现、放化疗的疗效评价具有举足轻重的地位。
1、实验方法和原理
细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一 是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使 PS 暴露在细胞膜外表面。PS 是一 种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂 分布的不对称性被破坏而使 PS 暴露在细胞膜外。
Annexin V 是一种 Ca+依赖的磷脂结合蛋白，最初发现是一种具有很强的抗凝血特性的血 管蛋白，Annexin V 具有易于结合到磷脂类如 PS 的特性。对 PS 有高度的亲和性。因此， 该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的 PS。
PS 转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差 别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。 因此，可以建立一种用 Annexin V 结合在细胞膜表面作为凋亡的指示并结合一种染料排除 试验以检测细胞膜的完整性的检测方法。
2、实验材料、试剂、仪器和耗材
细胞；HEPES 缓冲液、NaCl、CaCl2、PI、ANNEXIN V-FITC 试剂盒； 流式细胞仪。
3、实验步骤
一、试剂与仪器
1. 孵育缓冲液：10 mmol/L HEPES/NaOH，pH7.4，140 mmol/L NaCl，5 mmol/L CaCl2。
2. 标记液：将 FITC- Annexin V（宝灵曼公司产品）和 PI 加入到孵育缓冲液中，终浓度均 为 1 ug/ml。
3. 流式细胞仪。
二、实验步骤
1. 细胞收集：悬浮细胞直接收集到 10 ml 的离心管中，每样本细胞数为（1~5）×106/mL500~1 000 r/min 离心 5 min，弃去培养液。
2. 用孵育缓冲液洗涤 1 次，500~1 000 r/min 离心 5 min。
3. 用 100 ul 的标记溶液重悬细胞，室温下避光孵育 10~15 min。
4. 500~1 000 r/min 离心 5 min 沉淀细胞孵育缓冲液洗 1 次。
5. 加入荧光（SA-FLOUS）溶液 4℃下孵育 20 min，避光并不时振动。
6. 流式细胞仪分析：流式细胞仪激发光波长用 488 nm，用一波长为 515 nm 的通带滤器 检测 FITC 荧光，另一波长大于 560 nm 的滤器检测 PI。
7. 结果判断：凋亡细胞对所有用于细胞活性鉴定的染料如 PI 有抗染性，坏死细胞则不能。 细胞膜有损伤的细胞的 DNA 可被 PI 着染产生红色荧光，而细胞膜保持完好的细胞则不会 有红色荧光产生。因此，在细胞凋亡的早期 PI 不会着染而没有红色荧光信号。正常活细胞 与此相似。在双变量流式细胞仪的散点图上，左下象限显示活细胞，为（FITC-/PI-）；右 上象限是非活细胞，即坏死细胞，为（FITC+/PI+）；而右下象限为凋亡细胞，显现（FITC+/PI-）。
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白肿叔3233细胞死亡与细胞凋亡的区别是什么? -
时韦春18116971297 ______ 细胞死亡本身就包含了细胞坏死和细胞凋亡两方面 细胞坏死就是不正常的死亡,比如车祸死了,被损伤坏死了等等外部条件引起的死亡. 细胞凋亡是细胞编程性死亡是由基因本身决定的,也就是内部条件引起的,比如蝌蚪尾巴消失,花凋谢,细胞衰老而死亡,溶酶体的自溶现象(自体吞噬:清除细胞中无用的生物大分子,衰老的细胞器)这些都是细胞凋亡的例子
白肿叔3233细胞凋亡与细胞坏死的最本质区别是什么 ,就一条最本质的区别 -
时韦春18116971297 ______[答案] 细胞程序性死亡 概念:细胞程序死亡(programmed cell death,PCD)也常常被称为细胞凋亡,是生物体发育过程中普遍存在的,是一个由基因决定的细胞主主动的有序的死亡方式.具体指细胞遇到内、外环境因子刺激时,受基因调控...
白肿叔3233正常的细胞细胞都会调亡么,凋亡和死亡有什么区别 -
时韦春18116971297 ______ 细胞凋亡属程序性死亡,是受基因控制的正常死亡;而死亡原因很多,与可能细胞并未到达死亡时限而受外伤等而非程序性死亡. 凋亡是死亡的一种方式.
白肿叔3233细胞凋亡和坏死时释放的细胞内容物都会伤害周围细胞?它们会释放什么? -
时韦春18116971297 ______[答案] 凋亡细胞时,DNA裂解,染色质浓缩,细胞膜活化,细胞皱缩,最后形成由细胞膜包裹的凋亡小体,然后,这些凋亡小体被其他细胞所吞噬.因此不会伤害周围细胞. 细胞坏死时,细胞胀大,胞膜破裂,细胞内容物外溢,核变化较慢,DNA降解不充分...
白肿叔3233细胞凋亡可以终止或者逆转吗? -
时韦春18116971297 ______ 你好朋友 细胞凋亡不可逆转,细胞坏死可逆转.细胞凋亡又称细胞编程性死亡,指的是细胞按照自然规律(即基因)死亡.而细胞坏死指的是非正常因素导致细胞死亡,比如划伤,割伤,烫伤,等外伤 望采纳,谢谢!
白肿叔3233细胞凋亡和细胞坏死分别对机体的影响 -
时韦春18116971297 ______ 细胞凋亡是由基因控制的程序性死亡,是一种正常的现象,一般不会产生影响. 细胞坏死与细胞凋亡相比,是由外界创伤引起的,最大的区别是“细胞坏死会产生炎症反应”,也就是化脓等.
白肿叔3233细胞坏死与细胞死亡的区别细胞坏死是在____的影响下,由于细胞正常新陈代谢活动______引起的细胞_____,对生物体是不利的:而细胞凋亡是一种____... -
时韦春18116971297 ______[答案] 细胞坏死是在(外界环境)的影响下,由于细胞正常新陈代谢活动(异常)引起的细胞(破裂),对生物体是不利的:而细胞凋亡是一种(正常)的生理过程,对生物体是有利的.
白肿叔3233细胞凋亡的概念、形态特征及其坏死的区别是什么 -
时韦春18116971297 ______ 细胞凋亡是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡.细胞凋亡与细胞坏死不同,细胞凋亡不是一件被动的过程,而是主动过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用;它并不是病理条件下,自体损伤的一种现象...
白肿叔3233细胞凋亡的定义,生物学特征和生物发育中的作用,正常新城代谢的过程 -
时韦春18116971297 ______[答案] 有积极的意义. 细胞凋亡是指为了保持一个稳定的环境,自组装成由基因控制的细胞死亡.细胞凋亡和坏死,细胞凋亡是一个被动的过程,而是主动过程,它涉及一系列基因的激活和表达以及调控的作用,这是不是一种病态的条件下,自体损伤的现象...
白肿叔3233细胞衰老和细胞凋亡有何区别?
时韦春18116971297 ______ 细胞衰老:随着时间的推移,细胞增殖能力和生理功能逐渐下降的变化过程.细胞在形态上发生明显变化,细胞皱缩,质膜透性和脆性提高,线粒体数量减少,染色质固缩、断裂等. 细胞凋亡是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡.细胞凋亡与细胞坏死不同,细胞凋亡不是一件被动的过程,而是主动过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用,它并不是病理条件下,自体损伤的一种现象,而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程.