细胞培养中pbs有什么作用
细胞实验是科学研究中较为常见的实验，其中原代细胞以其最接近和反映体内生长特性的特点，在细胞实验中被广泛应用。
那么，什么是原代细胞？
原代细胞是指来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞。初代培养物第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。原代细胞的提取主要包括取材、分离、培养、纯化，本次将主要介绍原代细胞的取材与分离。
取材：取材是原代细胞提取的第一步，也是原代细胞培养成功的首要条件。取材前需要注意组织类型、分化程度、年龄等；注意避免机械损伤，去除无用组织，同时避免干燥，最重要的是要严格控制无菌。另外，整个取材过程，在保证无菌的条件下，尽量快速完成，以保证样本的新鲜和细胞活性。血液、骨髓、羊水等取材，不仅要严格控制无菌，还需要注意抗凝。
分离：取材完成后，需要尽快采用适当的方法将细胞分离出来。
悬浮细胞的分离
将取材得到的血液、羊水、胸水或腹水等进行低速离心，1000r/min，5-10min；收集细胞沉淀，用PBS（不含钙、镁）洗两次，再用培养基洗一次，最后用培养基重悬细胞，调整细胞浓度后分瓶培养。若想要提取的细胞不在沉淀中，而是在细胞悬液中，则需要加入细胞分层液，经离心后，由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，从而分离出细胞。
实体组织中细胞的分离
机械分散法
首先用剪刀和吸管将组织剪切并吹打分散细胞，然后将已充分剪碎分散的组织放在注射器内使细胞通过针头压出，最后在不锈钢网内用钝物挤压将细胞从网孔中压挤出。
这种分离细胞的方法简便、快速，适合纤维成分少的软组织，如脑组织，部分胚胎组织等，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差。
消化分离法
这个方法就是将组织剪切成小块，再利用酶（胰蛋白酶和/或胶原酶）的生化作用和/或非酶（EDTA）的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，再结合机械法（用吸管吹打分散或电磁搅拌）使细胞团块得以较充分的分散，制成细胞悬液。
酶或非酶的选择需要根据组织及细胞的特性进行选择。一般来讲，胰蛋白酶适合用于消化软组织，胶原酶适合消化纤维较多的组织，而EDTA则对上皮组织分散效果较好。另外，也可以将EDTA与胰蛋白酶以1:1或1:2的比例混合使用，这样不仅利于细胞脱壁又利于细胞分散，可降低胰蛋白酶的用量和毒性作用。
这种方法还需要注意的是，组织块需要使用PBS（不含钙、镁）漂洗2-3次以去除组织中的钙、镁离子和血清对胰蛋白酶和EDTA的抑制作用；同时，胰酶浓度不宜过高，作用时间不能太长，以免过量损伤细胞；消化后的组织要尽量轻柔地弃去消化液。
说明：转载仅为分享目的,部分文章图片因转载众多无法确认原始作者的,仅标明转载来源;版权归原作者所有,如有问题,请联系小编删除,谢谢！
","gnid":"9b1b4e1fa27f4fe61","img_data":[{"flag":2,"img":[{"desc":"","height":"2304","title":"","url":"https://p0.ssl.img.360kuai.com/t015a6f90f7c0f3b674.jpg","width":"3072"}]}],"original":0,"pat":"art_src_0,fts0,sts0","powerby":"hbase","pub_time":1688701624000,"pure":"","rawurl":"http://zm.news.so.com/361ac6f11a57a0aa9f0636d174fbb379","redirect":0,"rptid":"c44a31fb867187ff","rss_ext":[],"s":"t","src":"环凯微生物","tag":[{"clk":"kscience_1:细胞","k":"细胞","u":""}],"title":"原代细胞提取之取材与分离
寿翁筠3827为什么做细胞实验的PBS缓冲液不含钙离子和镁离子? -
颜巩录17885769826 ______ 因为:PBS中加入了Na2HPO4和0.24g KH2PO4,他们能与钙离子和镁离子,金属离子结合生成沉淀, 附: 0.01M 磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法 称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调节...
寿翁筠3827PBS就是一般的磷酸缓冲液吗?!
颜巩录17885769826 ______ PBS在医学词汇中表示磷酸盐缓冲液,用于分子克隆及细胞培养,pH=7.4,与人体血液等渗,主要成分为磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠以及氯化钾.
寿翁筠3827为什么要用冷的PBS洗细胞 -
颜巩录17885769826 ______ 细胞传代培养一般是用室温的PBS洗涤的(很少听说用冷的PBS); 而在做相关的细胞试验会用到预冷的PBS洗涤的,如流式细胞样品的处理要用冷的PBS洗涤的,有利于标记上抗体.
寿翁筠3827细胞培养的pbs ph不在范围内会怎样 -
颜巩录17885769826 ______ 不行,齐氏生物认为生理盐水里面随便渗透点物质,pH变化很大.不然要PBS干嘛呢?而且PBS配置起来很容易啊,就两种物质而已.不清楚可以咨询专业的细胞培养机构.希望能帮到你!
寿翁筠3827细胞培养中用的PBS缓冲液的浓度是多少怎么配置?0.1M的和0.01M的用途有什么区别? -
颜巩录17885769826 ______[答案] 0.01M的
寿翁筠3827在动物细胞培养过程中,先后两次用胰蛋白酶,配制成细胞悬浮液,其作用分别是 -
颜巩录17885769826 ______ 第一次作用是洗掉原培养基吸附在细胞上的残留血清等物质,充当洗换液的作用,其实可以用其他溶液替代,比如PBS、hank`s、edta等,因为原培养基中残留血清会钝化胰酶,所以应当洗去;第二次用胰酶的的作用就是消化细胞,从而得以制得细胞悬液.
寿翁筠3827·细胞培养用液怎样配制? -
颜巩录17885769826 ______ (1)水的制备: 细胞培养用水必须非常纯净,不含有离子和其他的杂质.需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水. (2)PBS的制备与消毒(也可用于其它BSS,如:Hanks,D-Hanks液的配制): 1.溶解定容:将药品(NaCl 8.0g,KCl 0.2g,Na2...
寿翁筠3827细胞培养的主要条件和注意事项以及使用的试剂 -
颜巩录17885769826 ______ 要做细胞培养的话,硬件条件包括:细胞室(最好带空气净化系统),超净工作台,培养箱,离心机,冰箱,显微镜(倒置),常规培养耗材及移液枪等. 操作原则:无菌(最基本的),培养环境的稳定(温湿度保持恒定,不轻易改变培养基及添加物等,传代换液时操作要快,尽可能缩短在培养箱外的操作时间) 使用的试剂有:培养基,PBS,传代用消化液,血清,抗生素(青链霉素),培养用添加物(非必需氨基酸,细胞生长因子等)
寿翁筠3827细胞培养配PBS,KH2PO4、磷酸氢二钠(Na2HPO4.2H2O)、Kcl、Nacl,各个用量是多少? -
颜巩录17885769826 ______[答案] NaCl 8g 、KCl 0.2g 、 Na2HPO4 1.44g和 KH2PO4 0.24g这个配方就可以,一般的培养细胞用的PBS,简单点的就是加了点K离子,为了保持活细胞膜内外的钠钾离子平衡,两种磷酸根的配比是为了维持PH,另外加的氯化钠是维持离子...
寿翁筠3827细胞培养的PBS如何制备与消毒? -
颜巩录17885769826 ______ PBS的制备与消毒(也可用于其它BSS,如:Hanks,D-Hanks液的配制): 1.溶解定容:将药品(NaCl8.0g,KCl0.2g,Na2HPO4·H2O1.56g,KH2PO40.2g) 倒入盛有800ml双蒸水的烧杯中,玻璃棒搅动,充分溶解, 调节PH至7.4,然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml,摇匀即成新配制的PBS溶液. 2.移入溶液瓶内待消毒:将PBS倒入溶液瓶(大的吊针瓶)内,盖上胶帽,并插上针头放入高压锅内消毒20分钟.注意高压消毒后要用灭菌蒸馏水补充蒸发掉的水份.