翌圣高保真酶

都蒲惠597为什么PCR产物末端有A? -
姬花环17573487161 ______ 因为PCR用的DNA聚合酶无5 ' 到 3 '外切酶的活性,校对功能较差,而具备在dNTP过量时,在产物末端添加A,故PCR产物末端有A,若扩增PCR产物较长,需要高准确率时,采用高保真酶,末端不加A 而高保真酶扩增产物要连TA克隆时,可加入Taq酶,在产物末端加A 因为一般PCR采用的是Taq酶扩增,产物末端都有A

都蒲惠597利用高保真酶PCR产物长时间低温保存会裂解吗 -
姬花环17573487161 ______ 这个和一段时间有关系,取决于你在4C放了多长时间.通常,4C短期内,不会导致DNA大量降解,但是如果时间太长,肯定会有变化.加尾以后可能会导致一些小的裂解片段也被连到载体转到宿主中.如果实在不愿意再做一次,就把样品跑个电泳,切条带回收后再加尾.转化后多挑几个克隆去验证.

都蒲惠597用高保真聚合酶PCR 可不可以和普通buffer一块用 -
姬花环17573487161 ______ 简单地说,什么公司生产的酶,都会配带附属的buffer,最好搭配着用.最好不要用A公司的酶搭配B公司的buffer.当然,即便是一个公司的产品,不同的酶用的buffer也是固定搭配的.人为最好不要改动,不同的buffer盐离子和一些其他成分不一样.

都蒲惠597高保真酶的PCR结果我之前用TAKARA公司的Ex - Tag酶进行PCR,可以P出较好的条带,但用了TAKARA公司的高保真酶Prime STAR GXL DNA polymerase ... -
姬花环17573487161 ______[答案] EX-TAQ很容易出现杂带的,这个酶本身的BUFFER是高离子浓度.你可以试试用EXTAQ酶扩出条带后,在琼脂糖胶上切下纯化在用高保真酶扩一下,扩出来就是有产物扩不出就是非特异扩增

都蒲惠597片段太长(接近4000bp),用高保真的酶KOD plus扩增,回收后加A了,连不上怎么办啊? -
姬花环17573487161 ______ 1, 改变PCR产物和TA质粒的比例;转染时多方连接后产物;涂盘时多涂细菌. 2,如果还不行.重新设计引物,在两端加上酶切位点,PCR后用限制性内切酶消化.质粒也同样消化.再连.

都蒲惠597PCR目的条带太弱 并无非特异性条带 怎样改进可以使目的产物的量加大 -
姬花环17573487161 ______ 可以扩增两次,用第一次的产物做模板进行第二轮扩增.两次都使用高保真酶扩增可以减少突变.

都蒲惠597在PCR过程中没有修复酶,那么在初期会容易发生目的基因关键碱基对的突变吗?几率差不多多少?结果如何?
姬花环17573487161 ______ PCR中有一定概率会出现突变.突变率依照所用聚合酶不同而不同.普通Taq酶大约为5千碱基错一个,而高保真酶(如KOD等)可以达到平均1百万碱基错一个.

都蒲惠597点突变pcr后的产物是线性还是环形将质粒用fermentas的高保真酶PCR后 得到的产物是线性还是环形的? -
姬花环17573487161 ______[答案] 模板线性环状都可以 比如人基因组dna是线性的 质粒是环状的 pcr产物都是线性的不要说做突变的一个方法是p出环状突变型质粒 其实那个不是pcr 带缺口的双

都蒲惠597我扩增的片段大概1400bp,GC含量较高,用LA Taq可以扩增出来,但有突变,用高保真酶又扩增不出来,怎么办? -
姬花环17573487161 ______[答案] 可用混合酶进行扩增,一般可以挑到无突变的克隆. 另外可以控制扩增的次数,你估计一下模板含量,然后用乘以和扩增相关的系数2^(0.7*n),其中n为扩增次数.这个方法还是比较准确,控制循环次数可以把相差两个Log的DNA扩增到基本相同的含量...