质粒酶切前后电泳图
卫周珠999刚活化后 提取的质粒(小量试剂盒提取法) 电泳图为什么会出现2、3条带? -
雍晴虏18976093498 ______ 这是很正常的,质粒提取过程中或多或少会对质粒本身造成一定的损伤,根据损伤的不同,质粒通常会出现三种不同的构型,分别是双链环状,线性分子(机械损伤造成质粒链完全断开)和单链开环(双链中只有一条链断开,另外一条是闭合的...
卫周珠999DNA电泳图结果分析以上是我实验的电泳结果,一共做了三个试验,最后一起跑的电泳,从边开始,第一个是mark,第二个是质粒DNA的提取,第三个是... -
雍晴虏18976093498 ______[答案] 首先看第二泳道,能够看见两条带,一般的质粒跑完电泳都是这种情况,因为质粒容易开链,变成线性的,或者是半线性半环状,而环状的比线性的跑的快,所以上面那条浅的应该是开链的质粒,下面的是环状的质粒,不过不要紧,一般都...
卫周珠999...(2)如果是两两重组,可能有___种长度的重组结果.(3)基因工程中检测筛选含有目的基因的重组质粒是一个重要的步骤.现运用___酶切质粒,完全酶切后... -
雍晴虏18976093498 ______[答案] (1)由图可知,质粒A中缺少标记基因,质粒C中的复制原点被酶切割,所以A、C不能作为运载体. (2)用DNA连接酶连接时,可能出现质粒环化、目的基因环化、形成重组质粒,有3种长度的结果. (3)根据题意,质粒长度为2.7kb,目的基因长度...
卫周珠999PCR产物和质粒双酶切后电泳如何判断酶切完成? -
雍晴虏18976093498 ______ 你是不是要把双酶切后的质粒与载体连接,而无论是PCR还是载体都无法通过电泳判断是否酶切完全,所以不好进行连接呀?对于PCR产物一般会采取这样的策略,将产物首先连接到T载体上,然后再用设计好的双酶切,电泳回收切下的条带,这样就能确保得到的是完全酶切的产物.载体判断比较麻烦,要看载体本身、多大双酶切为点之间的条带有多大、双切前后的大小是否能通过电泳区别出来,但是双切位点一般都在标记基因里面,所以插入片段的载体会在后期转化可以后区分开,所以也没有太大必要确定他是否完全,只要充分酶切就好了.
卫周珠999质粒酶切电泳 -
雍晴虏18976093498 ______ 首先,你要根据marker确定你的质粒大小,你得先知道你的质粒到底有多大,然后对比marker看.要是有一条又亮又宽的带比你查到的质粒大小要小,那条就是超螺旋带,超螺旋比线性质粒跑得快些.还有一条和你的质粒大小一样的,那就是线性质粒的带.如果后面还有一条比较大的,可能是复制中间体,要是后头那个离上样孔很近,跑不动又模糊一片的,就是基因组污染. 看上去,你的质粒都没啥问题,就是提取质粒的时候力道有点大,有不少线性质粒,被你打开了.最好的质粒提取出来只有一条超螺旋的带.
卫周珠999质粒单酶切出现两条带 -
雍晴虏18976093498 ______ 可能是质粒仅有单酶切的一个位点,部分酶切了,部分没有酶切,酶切的是多数,所以产生条带较大(也就是浓度的不同)~~但是完整的质粒和酶切后的质粒条带因为结构关系应该不会很近诶!~~~可以看哈是不是电泳的时间不够~~!! 若是存在两个以上的单酶切位点,原则上可以产生多种条带~~比如有两个单酶切位点可以产生:完整的质粒,单酶切的一个位点被切,两位点被切三种情况;这样的原则上会产生四种大小不同的条带!!酶切位点越多条带数应该越多才是!~~ 若是多位点的,可能会是电泳跑得不好,没有分出明显的条带!~~ 没做过质粒酶切电泳,仅是理论上分析的哈!!
卫周珠999大肠杆菌质粒DNA没有酶切进行电泳,跑出来的条带大约应该是多少bp?有没有比较好的标准的可参考图? -
雍晴虏18976093498 ______ 质粒大小不一定的,小的2kb左右,大的十几kb,上百kb,跑出来在marker的位置也肯定不一样. 一般的质粒如果提取得好,就是超螺旋的结构,电泳位置要小于质粒本身的大小,由于超螺旋数的不同,一般条带较宽,圆乎乎的,可以参照百度图片. 如果提取得不好,那就还有开环质粒,电泳在质粒大小相同的位置上,甚至还有复制中间体,这个要比质粒本身大些.
卫周珠999如何通过电泳图谱判断质粒分子量 -
雍晴虏18976093498 ______[答案] 直接用环状的质粒跑电泳是很难判断其分子量的 一般来说要先找到上面的一个相应的酶切位点(这个酶在这个质粒上只有一个识别域).把质粒完全切开后再跑琼脂糖凝胶电泳,配合适当的marker就可以比较准确的判断质粒的分子量. 有问题一起讨论...
卫周珠999从细胞中提取质粒然后电泳,为什么一种质粒可以跑出两条带? -
雍晴虏18976093498 ______ 正常的现象,没有酶切过的质粒有两种形态,环形和超螺旋,超螺旋的跑在前,环形在后,不能用bp大小去衡量,只有线性化的才能通过普通的凝胶电泳区分大小.未知回答是否满意.
卫周珠999按照试剂盒提取的质粒,应该出现几条带啊?为什么我只有两条条带出现呢?请高手指点!谢谢! -
雍晴虏18976093498 ______[答案] 用酚、氯仿法从工程菌中提取的质粒一般有三种构像,即超螺旋,线形和开环.(开环质粒是指双链环状的质粒DNA有部分解链,因此电泳速度最慢)三种构像的质粒在琼脂糖电泳的前后顺序是超螺旋>线形>开环,线形的质粒在中间,而开环的质粒...