质粒双酶切电泳图怎么看
鲁幸贵4710载体是否双酶切完全 -
从贫盼18766233375 ______ 原载体质粒回收后电泳可能出现三条带 环状质粒、复制中间体、开环的质粒.复制中间体的大小接近质粒的两倍,开环的质粒跑的比环状的要快,在质粒的上方.不知你说的是哪两条; 双酶切看你的酶切位点设在哪里,理论上应该切下两个片段,如果两个片段大小上差距不大则电泳时很难分开,就是一条带了,如果切下的小片段很小,在电泳图上也很难显示;一般质粒双酶切不会出现这两种情况,所以我认为如果切开了应该是两条比较亮的带,上面的那条应该比下面的那条稍亮. 总之,应该设置没有切开的质粒做对照,做个比较就知道了; 希望对你有用
鲁幸贵4710在电泳图谱中如何判断DNA限制性内切酶切得是否完?在电泳图谱中如
从贫盼18766233375 ______ 这个本来就是要判断,人家怎会告诉你那个患病呢?解释突变基因只能切成一个长段,故,含患者必然所有电泳的片段只有一个种类(就是像丙这样的)完全正常的由于中间多了一个酶切位点,因此将会被切成两段(就像乙)甲这种就是杂合子,aa的乙就是aa(不含突变基因)丙是患者,aa.
鲁幸贵4710如果质粒dna双酶切电泳后,在胶上出现1)没有条带2)一条3)两条4)三条5)多条,都是什么原因? -
从贫盼18766233375 ______[答案] 1) 质粒上没有这两种酶的酶切位点(或操作失误,试验失败) 2)质粒上只有一种酶的酶切位点或两个酶的位点非常接近(
鲁幸贵4710质粒酶切电泳 -
从贫盼18766233375 ______ 首先,你要根据marker确定你的质粒大小,你得先知道你的质粒到底有多大,然后对比marker看.要是有一条又亮又宽的带比你查到的质粒大小要小,那条就是超螺旋带,超螺旋比线性质粒跑得快些.还有一条和你的质粒大小一样的,那就是线性质粒的带.如果后面还有一条比较大的,可能是复制中间体,要是后头那个离上样孔很近,跑不动又模糊一片的,就是基因组污染. 看上去,你的质粒都没啥问题,就是提取质粒的时候力道有点大,有不少线性质粒,被你打开了.最好的质粒提取出来只有一条超螺旋的带.
鲁幸贵4710DNA酶切后电泳,条带呈复带的原因做双酶切,跑出来每个带都像一个“=”,都分别由两个极近的带组成.求可能的原因 -
从贫盼18766233375 ______[答案] 你酶切的DNA是什么? 质粒的话,双酶切中间有几十bp以上,切出来的条带就是两条,这个你应该能判断的. 如果是pcr产物酶切出现了两条极近的带,那么很有可能是因为pcr产物纯化时有杂带污染,一开始跑胶的时候看不出来,后来你回收浓缩再...
鲁幸贵4710对于载体的单酶切和双酶切,胶图分别会如何?为什么会这样啊?谢谢帮忙回答? -
从贫盼18766233375 ______ 单酶切一个电泳道上会有几个比较亮的带,而且你所根据基因大小所选择的条带内也不一定是你要的.原因是单酶切形成的粘性末端完全相同,就像拼图,除了内容不同,两边完全切合.所以结合方式过多,可能性也多,如质粒和目的基因正确连接,质粒和目的基因反转连接,质粒和质粒连接,目的基因与目的基因的连接. 双酶切一般会有3条带,而且正确现象应只有一个是非常亮的.因为两种酶识别两个位点切开,无论是质粒还是目的片段两端的粘性末端完全不同,还是拼图,内容不同,两端切合口也不同,除了一种连接方式外没有其他连接了.胶途中3条带分别为:目的片段条带,空质粒条带,最亮的重组质粒条带.
鲁幸贵4710问个重组质粒的电泳图和重组质粒pcr产物的电泳图的基本问题 -
从贫盼18766233375 ______ 首先,重组后的质粒肯定比载体大,可以通过电泳一定的区分,通过这个对比的话最好是酶切过后的 其次,因为你重组的片段是通过PCR扩增出来的,所以你重组要是成功了,那么就可以用相同的引物扩增出来,所以PCR做完了过后,电泳时会出现和目的条带一样大的条带,反之则不成功 显然这两种方法第二种最靠谱,第一种情况由于质粒较大,要是插入片段太小的话,可能分的不是很清楚,最后电泳的意义就在于看插入片段是否正确,并且理论上看是不是正确的插入方向
鲁幸贵4710按照试剂盒提取的质粒,应该出现几条带啊?为什么我只有两条条带出现呢?请高手指点!谢谢! -
从贫盼18766233375 ______[答案] 用酚、氯仿法从工程菌中提取的质粒一般有三种构像,即超螺旋,线形和开环.(开环质粒是指双链环状的质粒DNA有部分解链,因此电泳速度最慢)三种构像的质粒在琼脂糖电泳的前后顺序是超螺旋>线形>开环,线形的质粒在中间,而开环的质粒...
鲁幸贵4710怎么对提取质粒进行鉴定? -
从贫盼18766233375 ______ 首先跑一个琼脂糖凝胶电泳,观察一下带型和大小是否符合,然后根据质粒所含有的酶切位点,选择合适的限制性内切酶进行单酶切或双酶切,观察酶切后的条带数和大小是否与理论一致.
鲁幸贵4710DNA酶切反应不彻底电泳图谱是怎样的?DNA若发生降解,酶切图谱又是怎样的 -
从贫盼18766233375 ______[答案] DNA酶切反应不彻底电泳图谱会产生额外的条带,比如本来一个大片段彻底切开后可以产生3个小片段.如果不彻底切开,那电泳的时候就会又有大片段,又有两两组合的中等判断,也会有3个小片段. 如果发生降解,条带就会变得模糊,没有降解的部...