dpn1酶切37度多长时间

宫顾伊2915如何对PCR扩增的产物进行酶切? -
冶罗泼17817749942 ______ Fermentas公司的研究表明,限制性内切酶在 PCR扩增体系中仍然有部分活性,可以通过稀释(3倍以上)扩增混合液,适当提高酶量和反映时间,进行酶切.个人认为需要对PCR产物进行酶切分析通常是为了或基因表 型分析,由于Taq,Pfu等高温聚合酶在酶切温度(37度虎弧港旧蕃搅歌些攻氓或更高)下,仍然保持一定的活性,高温聚合酶所具有的聚合或无模板添A或外切修正的功能仍在一 定的程度上表现出来,可能会影响到酶切产物末端的正确性.结果是要么装不上去,要么装上去切不下来,测序发现末端引物碱基少了.正确安全的做法是先通过琼 脂糖电泳回收产物,然后酶切,酶切可以适当提高酶的用量.

宫顾伊2915质粒酶切后 胶回收 -
冶罗泼17817749942 ______ 双酶切胶回收后片段浓度大概多少 如果你是测紫外定浓度,来判断酶切是否完全,这个方法是不靠谱的.只能大致判断你的回收效率. 要验证是否酶切完全,一是看跑胶时的条带数(也不完全靠谱,比如少量质粒没切开,但形成的条带弱,看不见),二是通过连接转化实验,看其自连情况如何. 想把质粒切好,主要是把酶切实验做好,时间、温度、酶量控制好.

宫顾伊2915单酶切时间长有坏处吗? -
冶罗泼17817749942 ______ 如果酶没有星活性的话,单切时间长一些没什么问题.但是如果该酶有星活性的话,一定不能切的时间过长.

宫顾伊2915酶切体系加完后可以放在室温吗? -
冶罗泼17817749942 ______ 你得看下那酶有没有星号活性吧 有的话会在非最佳温度的时候乱切 不过有的公司的酶说是加了buffer就能确保不会有型号活性 不好说 鉴于你多放好几个小时了 最好还是重新切吧

宫顾伊2915请问180℃干烤多久才能除去RNA酶?啊? -
冶罗泼17817749942 ______ 分子克隆第二版343页,上关于提取RNA所用的玻璃容器的处理方法,是用前180度干烤8小时或更长时间;另一种方法是0.1%的depc水浸泡(37度2小时),然后灭菌水淋洗数次,100度干烤15分钟,然后高压灭菌除去depc.我们实验室一直是用180度烘烤4小时,且不准离人,不准过夜,可能是怕烤箱长时间高温,线路老化会发生危险吧.

宫顾伊2915双酶切的20μL反应体系和反应时间如何确定?最好是说明原理.所用的酶都是Takara公司的 -
冶罗泼17817749942 ______ 模板DNA 几百ng-几ug,区别不大 酶1 0.5ul 酶2 0.5ul buffer 去Takara产品目录查双酶切buffer表,按照那个倍数加,有时候需要BSA 水补足 20ul 30或37度,1-5小时都可以.有个别酶需要55度. 注意,酶别加多了,甘油浓度过高影响酶的活性.反应体系中甘油浓度要小于1%,而酶是储存在50%甘油中.

宫顾伊29155000bp的载体,从中切下50bp的片段,能否电泳看出来啊,要多大的胶浓度才好分辨,谢谢啊! -
冶罗泼17817749942 ______ 50bp的碱基的确有点小,你可以倒2.0%以上的胶,用100v电压跑40分钟试试,但是我估计你的双酶切的酶可能具有星火活性,即会出现把50bp切碎了的可能,所以,建议你37度酶切3小时就电泳,难度还是有点大.

宫顾伊2915如何提高限制性酶切的反应效率 -
冶罗泼17817749942 ______ 1 DNA纯度 在DNA样品中若含有蛋白质,或没有去除干净制备过程中所用的乙醇、EDTA、SDS、酚、氯仿和某些高浓度金属离子,均会降低限制酶的催化活性,甚至使限制酶不起作用. 2 核酸内切限制酶的缓冲液 核酸内切限制酶的标准缓冲...

宫顾伊2915在DNA限制酶切实验中,温度对酶切效果有何影响? -
冶罗泼17817749942 ______ 看什么酶喽,都有自己的最适温度,不过有次给BamH1用37度,其实该是30度的,不过最后照样切好了,就是说这个还行,别的没试过不用最适温度的.

宫顾伊2915甲基化酶与限制性内切酶有什么关系 -
冶罗泼17817749942 ______ DNA甲基化以后,就不再被限制性内切酶识别和切割.