qrtpcr引物设计

程贫可717RT - PCR的引物如何设计?
阳侦忽17380017164 ______ 引物可以通过一些软件设计,比如primer 5 ,但是还需要注意一些细节问题. 比如 1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计. DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的.在NCBI上搜索不同物种的同一基因,通过序列分析软件(比...

程贫可717primer5.0引物设计所用序列为什么是mRNA?做qRT - PCR时设计引物是直接将NCBI的mRNA区域中CDS区序列拷贝到primer5.0里面,可是做qRT - PCR前不是... -
阳侦忽17380017164 ______[答案] 设计引物的时候已经用到了两条链吧,一条链设计前引物,另一条设计后引物.RT-PCR得到的是双链cDNA,所以用mRNA设计或者用互补链设计都可以啊,因为着两条链都会用到,只要把U换成T,是绝对可以P出来的.

程贫可717PCR引物设计 正向引物为什么从5' - 3'照抄序列 ?这是为什么啊?引物不是要模板配对吗? -
阳侦忽17380017164 ______ DNA合成酶合成DNA的时候是按照5'-3'方向的,所以设计引物时候要将扩增序列放在引物的3'端一侧 DNA是双链,你照抄正链的序列,这个引物跟负链匹配

程贫可717以下哪些因素会导致pcr扩增产物污染 -
阳侦忽17380017164 ______ 引物和探针设计不当 为了最高效地设计用于实时荧光定量PCR的引物和探针,我们强烈建议您使用引物设计软件.大多数引物设计程序均包含了可调节的参数以设计最佳的引物和探针.这些参数涉及了引物/探针的Tm值、互补性、二级结构以及...

程贫可717求助miRNA QRT - PCR引物设计 -
阳侦忽17380017164 ______ miRNA引物设计(茎环法+染料法检测) 设计方法:通用茎环后端加miRNA后面6个碱基的反向互补序列为反转录引物,正向引物为miRNA去除后面6个碱基的序列,反向引物在茎环上.反转录茎环通用序列:...

程贫可717如何设计pcr,以及它的要求是是什么 -
阳侦忽17380017164 ______ 设计的目的是在两个目标间取得平衡:扩增特异性和扩增效率.引物分析软件将试图通过使用每一引物设计变化的预定值在这两个目标间取得平衡.设计引用有一些需要注意的基本原理: ① 引物长度 一般引物长度为18~30碱基.总的说来,决定引...

程贫可717做SOE PCR 无论如何都连接不上,哪位能帮忙想想办法!~~~ -
阳侦忽17380017164 ______ 重叠延伸PCR技术成功的关键是重叠互补引物的设计.可以有三种方法来设计引物,具体如下图所示.引物F及R为基因两端特异引物,其中Fm及Rm为中间引物.其中引物...