takara快切酶切体系

田荆雅4170为什么酶切实验要求加样迅速,要在冰上进行操作? -
衡廖刮17873168337 ______ 连接前最好将水、插入片段和载体混合好以后置于45度水浴5min,马上置于冰上冷却,再加入buffer和ligase. 双酶切时间及其体系:需要强调的是很多人建议酶切过夜,其实完全没有必要,我一般酶切3个小时,其实1个小时已经足够.应用大...

田荆雅4170请问谁做过Taraka的BamH I 与Fermentas的BstBI的双酶切?如何选择buffer?如何进行分步酶切? -
衡廖刮17873168337 ______ 怎么是两个不同公司的呢...分步酶切吧...比如先用Takara的体系BamHI 先切一下,我一般过夜酶切,然后酚-氯仿抽一下DNA,然后再用Fermentas的体系 BstBI切过夜...

田荆雅4170sall和Ecorl能双酶切吗?酶切体系和条件如何
衡廖刮17873168337 ______ 可以,用Takara得酶,缓冲buffer用 一成得buffer H, 其他反映条件同普通反应.我常用50uL反映体系,5ulbuffer 两种酶各1ul,其他得DNA和水补充

田荆雅4170sall和Ecorl能双酶切吗?酶切体系和条件如何sall和Ecorl能双酶切吗?酶切反应体系和条件如何,想做连接来 -
衡廖刮17873168337 ______[答案] 可以,用Takara得酶,缓冲buffer用 一成得buffer H, 其他反映条件同普通反应.我常用50uL反映体系,5ulbuffer 两种酶各1ul,其他得DNA和水补充

田荆雅4170我问下takara 的puc18载体的目的片段到底是连载什么位置?说明书上也没有, -
衡廖刮17873168337 ______ 目的片段都是连在多克隆位点之间的,载体和外源都用相同的限制性内切酶酶切,就可以将外源通过连接酶连接上载体.酶切验证时看你设计引物扩增外源片段的酶切位点是什么,就用什么酶切,不过如果外源及载体内部都没有(除MCS)的酶而且在载体酶切酶位点外侧的酶切位点也是可以用来验证的.

田荆雅4170有人用过TAKARA公司的Hinl I内切酶吗,好用吗 -
衡廖刮17873168337 ______ 没有没有,想用这个酶切PCR产物,初步验证某个片段是否存在

田荆雅4170如何选择酶切酶极其buffer -
衡廖刮17873168337 ______ 不同公司的酶和buffer命名和特性是不完全一样的.像takara公司的内切酶有一个双酶切的列表,列出了每两种酶双酶切最适用的buffer. 像NEB公司的话,酶4种buffer中的活性都列出来了,选一个两种酶活性都高的就可以了. 其他公司的产品也一样,主要是认真阅读说明书和产品资料.祝你好运.

田荆雅4170DNA a - tailing kit的作用是什么..简单的酶切酶连? -
衡廖刮17873168337 ______ ■ 制品内容 (20 次量)A-Tailing Enzyme (5 U/μl)10 μl10*A-Tailing Buffer100 μldNTP Mixture (each 2.5 mM)80 μlA-Tailing Control Insert* (50 ng/μl)10 μlBlunting Control Insert* (50 ng/μl)50 μl * A-Tailing Control Insert 和Blunting Control Insert各为5...

田荆雅4170Xho1和Nde1 50μl双酶切反应体系的配制?用Xho1和Nde1对载体质粒和目的片段分别进行双酶切,50μl的酶切体系应该怎样配制?我不知道每种试剂加多少好... -
衡廖刮17873168337 ______[答案] 由这两种酶组成的双酶切体系并不需要添加BSA,请你仔细核对,两种酶的最适反应温度均为37摄氏度所以双酶切温度应为37摄氏度.如果选用TaKaRa的限制性内切酶那么Buffer应使用H Buffer,对于50 μl的酶切体系而言应分别加...