takara酶切效果表

宰莺潘4247Xho1和Nde1 50μl双酶切反应体系的配制?? -
郗黛肺17382282735 ______ 由这两种酶组成的双酶切体系并不需要添加BSA,请你仔细核对,两种酶的最适反应温度均为37摄氏度所以双酶切温度应为37摄氏度.如果选用TaKaRa的限制性内切酶那么Buffer应使用H Buffer,对于50 μl的酶切体系而言应分别加入1.5 μl的Xho1和Nde1并且加入5 μl的10*H Buffer(使得酶切体系中的Buffer浓度为1*工作浓度),最后加入适量的质粒分子并双蒸水补足反应体积至50 μl.

宰莺潘4247Takara的T4连接酶反应产物可否直接用于转化 -
郗黛肺17382282735 ______ 可以,连接体系不要超过15ul,连接过夜后全部加入100ul感受态宿主菌中做转化.

宰莺潘4247Tail - PCR未能获得侧翼序列,四种ap引物都试过了
郗黛肺17382282735 ______ 你可以是试试,Takara的LA试剂盒!这个我们实验室就是用的这么,TAIL-pcr 不太好用!我觉得! 虽然TALL-PCR有着上述众多的优点,但是它仍然存在着不尽人意的地方: TAIL-PCR反应需要较多的引物组合.此外,由于AP引物存在有限的...

宰莺潘4247如何提高PCR产物克隆的效率 -
郗黛肺17382282735 ______ 【TA 克隆的优缺点】1、优点:(1)是目前克隆 PCR 产物最简便、快捷的方法.(2)不需使用含限制酶序列的引物,不需将 PCR 产物进行优化,不需把 PCR 产物做平端处理,不需在 PCR 扩增产物上加接头,即可直接进行克隆.(3)TA克隆选...

宰莺潘4247我问下takara 的puc18载体的目的片段到底是连载什么位置?说明书上也没有, -
郗黛肺17382282735 ______ 目的片段都是连在多克隆位点之间的,载体和外源都用相同的限制性内切酶酶切,就可以将外源通过连接酶连接上载体.酶切验证时看你设计引物扩增外源片段的酶切位点是什么,就用什么酶切,不过如果外源及载体内部都没有(除MCS)的酶而且在载体酶切酶位点外侧的酶切位点也是可以用来验证的.

宰莺潘4247将DNA片段和载体经EcoR1和Xho1双酶切3小时后,琼脂糖凝胶电泳、割胶回收,TaKaRa T4 DNA ligase 4度连接过夜,次日转化Top10细胞,Amp平板上长不出单菌落,为什么?
郗黛肺17382282735 ______ 原因太多了. 可能是双酶切没有切下来; 可能是电泳时间过长已经跑出去了或者根本就回收错了或者回收操作出问题了(胶回收试剂盒里面的试剂可能过期或者失效了); 可能是T4连接酶有问题; 可能是转化过程有问题(感受态细胞没有作好...

宰莺潘4247双酶切连接转化反应谁了解
郗黛肺17382282735 ______ 1、回收PCR产物:在进行PCR扩增时候,给引物两端设计好酶切位点,一般说来,限制酶的 选择非常重要,尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶,如BamHI,HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER,以及各酶在公用...

宰莺潘4247有人用过TAKARA公司的Hinl I内切酶吗,好用吗 -
郗黛肺17382282735 ______ 没有没有,想用这个酶切PCR产物,初步验证某个片段是否存在

宰莺潘4247高保真酶,PCR末端加A原理 -
郗黛肺17382282735 ______ 我觉得,有可能是含有普通taq酶的. 3'-5'外切活性是产生高保真性的保证.35外切可以纠错,切除错配碱基保证pcr的高保证性.但是这样也使得一些引物也降解了,为了保证扩增效率,加一些普通taq酶是可以的!

宰莺潘4247限制性内切酶的活性能保持多久 -
郗黛肺17382282735 ______ 酶是蛋白质,这你是知道的.蛋白质变性的温度是多少?具体的蛋白变性温度各有不同,但是通常是65 ℃以上,只要不超过这个温度就不会变性.HindⅢ和XbaⅠ在37 ℃上反应,说明这是两个酶的最适活性温度.只要你加入的酶量足够(参照相关文献),那么在4个小时之内,切完所有的DNA,那是没有问题的.不用去考虑酶性的问题.简单一点儿,商业的东西怎么可能会忽悠你?人家还等着你去再买一次呢.