taqman探针qpcr步骤

终玉很4258做q - PCR需要注意哪些方面? -
俟以房19890587611 ______ 1、成败的关键在引物,所以引物设计要特异性好,如果是Taqman法,探针设计要特异性好,可以尝试文献报道的序列;2、模板是基础,抽提的mRNA要注意保存,添加RNase抑制剂,尽快转录成cDNA,在-80度保存;3、加样的时候注意更...

终玉很4258荧光定量PCR的扩增产物长度为什么不能太长? -
俟以房19890587611 ______[答案] Taqman探针为基础的Real-time PCR以引物和探针序列决定反应的特异性,而通过荧光强度判断探针降解程度,从而推断模板量. 传统PCR通过琼脂糖凝胶电泳判断产物量,达到半定量的目的.由于EB等染色剂与较长片段DNA结合后才能显现可测量...

终玉很4258如何提高rt - pcr的拟转录效率 -
俟以房19890587611 ______ PCR技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品DNA,然后才进行自动热循环,最后进行产物鉴定与分析.

终玉很4258想检测某只动物有没有禽流感,,请问怎么检测? -
俟以房19890587611 ______ 本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术,针对HA基因设计特异引物和探针,对H9亚型禽流感病毒RNA的进行定性检测.检测灵敏度:对于接种的鸡胚尿囊液,检测的最高稀释...

终玉很4258FRET引物是什么 -
俟以房19890587611 ______[答案] Taqman探针法的出现是定量PCR技术的重要里程碑,之后在此基础上发展出了杂交探针法,以及荧光引物法,是对探针法的不断改进和简化.如果希望全面掌握定量PCR技术的研究人员就不能错过这些定量检测技术. 要提到荧光探针或者荧光引物,...

终玉很4258如何绘制表达谱并验证 -
俟以房19890587611 ______ Q1:你使用什么方法来确保灵敏而特异的miRNA表达谱?为什么?Galina Gabriely(哈佛大学) 我们通常利用多重定量pcr来对少量的人miRNA进行小规模图谱分析.这种方法的灵敏度和特异性比芯片更好,因此在待分析miRNA数量不多时是首...

终玉很4258mir162转基因是什?mir162转基因是什么
俟以房19890587611 ______ 转基因技术是将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中,由于导入基因的表... TaqMan探针实时荧光PCR检测结果表明,所设计的探针特异性强,检测低限(LOD...

终玉很4258数字PCR的原理? -
俟以房19890587611 ______ 数字 PCR 的工作原理在于将 DNA 或 cDNA 样品分割为许多单独、平行的 PCR 反应,部分这些反应包含了靶标分子(阳性),而其他不包含(阴性). 单个分子可以被扩增一百万倍或更多. 在扩增期间,TaqMan® 化学试剂及染料标记探针...

终玉很4258我还想请教一下哦,就是我的RTPCR,为什么不同的反转录的模板跑PCR,实验组和对照组的趋势每次会不同? -
俟以房19890587611 ______ 同一模板是技术重复,看来不应该是仪器问题,而生物学重复性不好,这是RT常见问题,尤其是RT-qPCR,涉及的环节很多,需要逐步检查和设置对照; 样品处理控制,如细胞培养的处理组和对照组是否严谨; 细胞计数是否准确; 考虑好是一步法RT-PCR还是两步法; RNA提取(最可能出问题的),是否污染、及时、降解;RNA降解很快,很容易受到RNASE污染,务必注意; RNA提取后,每次做电泳和紫外,比较重复性是否好; pcr时,设置内参、阳性、阴性对照,做好标准曲线. 个人见解,目前想到的就这么多,欢迎继续讨论,祝实验顺利!

终玉很4258谁能帮我问清RT - PCR,Real time - PCR和Real time RT - PCR? -
俟以房19890587611 ______ Real-time PCR中文译作“实时聚合酶链反应”,是一种最新发展的定量PCR技术.该技术借助于荧光信号来检测PCR产物,一方面提高了灵敏度,另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据,建立实时扩增曲线,准确地确定CT值,...