质粒导入感受态细胞原理

大肠杆菌转化可以：（1）将重组 DNA 分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制，增殖和表达， 以获得目的基因；（2）验证大肠杆菌感受态细胞效果；（3）用于分子生物学其他研究。

1 原理：

质粒 DNA 粘附在细菌细胞表面，经过 42°C 短时间的热击处理，促进吸收 DNA.然后在非 选择培养基中培养一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗菌素的培养基中生 长。

2 器材：

旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，干 式恒温气浴（或恒温水浴锅），制冰机，恒温摇床，培养皿（已铺好固体 LB-Amp），超 净工作台，酒精灯，玻璃涂棒，恒温培养箱。

3 材料和试剂：

质粒 DNA，重组 DNA，培养基（不加抗菌素），LB 培养基（加抗菌素），无菌 ddH2O， IPTG，X-gal。

4 实验准备：

无菌 ddH2O，1.5ml  离心管装入铝制饭盒（灭菌）、移液器吸头装入相应的吸头盒（灭菌），20%IPTG（M/V），2% X-gal（M/V，用 N,N-二甲基甲酰胺配）。

5 操作步骤：

（1）事先将恒温水浴的温度调到 42℃。

（2）从-70℃ 超低温冰柜中取出一管（100μl）感受态菌，立即用手指加温融化后插入冰 上，冰浴 5~10min。

（3） 加入 5μl 连接好的质粒混合液（DNA 含量不超过 100ng），轻轻震荡后放置冰上20min。

（4）轻轻摇匀后插入 42℃水浴中 1~2min 进行热休克，然后迅速放回冰中，静置 3~5min。

（5） 在超净工作台中向上述各管中分别加入 500μl LB 培养基（不含抗菌素）轻轻混匀， 然后固定到摇床的弹簧架上 37℃震荡 1h.

（6） 在超净工作台中取上述转化混合液 100~300μl，分别滴到含合适抗菌素的固体 LB 平板培养皿中，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀（注意：玻璃涂布棒上的酒精熄灭后稍 等片刻，待其冷却后再涂）。

（7）如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话，滴完菌液后再在平板上滴加 40μl 2% X-gal， 8μl 20% IPTG，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。

（8） 在涂好的培养皿上做上标记，先放置在 37℃恒温培养箱中 30-60min 直到表面的液 体都渗透到培养基里后，再倒置过来放入 37℃恒温培养箱过夜。

（9）  在被细菌污染的桌面上喷洒 70%乙醇，擦干桌面，写实验报告。

（10）观察平板上长出的菌落克隆，以菌落之间能互相分开为好。注意白色菌斑。

康泡盛5171一个感受态细胞可以吸附多少个和多少种质粒? -
慎兔桂13844541234 ______[答案] 不要纠结这个问题哈,这个问题应该没人能回答吧~在感受态细胞转化中,加入质粒后,适当地延长静置时间可以提高质粒的转化效率,原因是使质粒可以被感受态细胞充分吸附.在质粒转化中,经常会遇到多个质粒共转染一个细胞的...

康泡盛5171谁做过酶切质粒的实验啊,制感受态细胞然后转化呢?求详细过程及注意要点! -
慎兔桂13844541234 ______ 大肠杆菌电转化感受态细胞制备 第一天: 1. 将适合菌株(如XL1-Blue, DH5α)置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37°C下过夜培养 2. 高温灭菌大的离心瓶(250-500ml)以备第二天摇瓶用 3. 准备几瓶灭菌水(总量约1.5升),保存于冷冻室...

康泡盛5171DNA重组技术是怎样的原理 ,高中生物拜托各位大神 -
慎兔桂13844541234 ______ 最基本的原理是核酸内切酶的特异切割活性(高中一般只提粘性末端)和连接酶的链接活性,以及碱基互补配对.通过使用特定的核酸内切酶,将目的片段和经改造后的特定载体(质粒、病毒核酸链,其上有特异的切割位点,转录启动、终止序列,以及用于筛选表达的序列)切割,形成能够互补的粘性末端,再通过连接酶进行聚合形成重组子.将重组质粒(以质粒为例)导入感受态细胞,培养,筛选,最后进行表达 采纳哦

康泡盛5171为什么质粒和感受态细胞在温度低的情况下更容易吸附 -
慎兔桂13844541234 ______ 两种质粒是可以同时进入同一个感受态细胞的,比如构建腺病毒载体时.但是要求两种质粒进入同一个感受态细胞,转化效率非常低,一般需要电转或者其他的特殊处理. 由于质粒的不兼容性,拥有同种复制子的质粒不能在同一细胞内稳定共存,经过几代的复制,会质粒丢失,所以并不是任何两个或两个以上质粒都可以在同一细胞内稳定存在,但是可以同时进入.

康泡盛5171质粒的提取原理 -
慎兔桂13844541234 ______ 质粒提取是指去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒. 目录 一、质粒提取原理 质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA,是进行DNA重组的常用载体.作为一个具有自身复制起点的复制单位...

康泡盛5171如何将一个质粒dna转入到大肠杆菌感受态细胞中?并且如何鉴别是否转化成功 -
慎兔桂13844541234 ______ dna工程,还是高中的知识,所以可能不正确 先用dna剪切酶剪短质粒dna,然后把待转dna用dna连接酶连接到断裂处 鉴别则用培养基,看是否有转入dna所期望达到的功能

康泡盛5171感受态细胞可以摄入什么东西质粒,还是DNA -
慎兔桂13844541234 ______ 必须用质粒才能转化 外源基因如果直接导入的话,无法自我进行复制和稳定生存以及表达,因此基因必须要经由载体导入细胞,才能表达.比如大肠杆菌就可以作为载体运送所需要的基因,而且载体上有标记基因,可以知道基因是否导入.直接导入的话它只是一个分子片断,没有能力自我复制,且无法一直生存.必须要有能复制和表达的结构比如质粒搭载它,才能完成目的.

康泡盛5171把重组质粒培养为细胞叫什么方法 -
慎兔桂13844541234 ______ 要把重组质粒导入土壤农杆菌,首先必须用Ca2+处理土壤农杆菌,使土壤农杆菌转变为感受态;然后将将重组质粒和感受态细胞在缓冲液中混合培养完成转化过程.其实就是制备感受态的问题,和其它的细菌制备感受态是一样的.

康泡盛5171当质粒加入宿主细胞进行转化,为什么在 -
慎兔桂13844541234 ______ 质粒构建的关键步骤是在需要导入的外源基因片段上加入易于识别的选择标记基因,比较常见的是导入抗生素抗性基因比如AMP或KAN、Tc.然后通过把导入质粒的感受态细胞涂布在含有特定抗生素的培养基上进行筛选.另外常用的也有营养缺陷筛选、显色模型筛选法,噬菌斑筛选法.望对你有帮助!

康泡盛5171为什么质粒上要有标记基因目的是?详细点 谢谢 -
慎兔桂13844541234 ______ 为了检测目的基因是否成功导入 假若标记了X霉素的抗性基因 那么质粒成功导入的个体中就应该能抗X霉素 在X霉素的环境下培养 生存下来的就是成功导入质粒的 这样就...