质粒转化bl21感受态不长菌

尚福斌32391、如何以大肠杆菌的质粒DNA为载体克隆一个编码动物的技术的基并使之在大肠杆菌中表达 -
松陈珊15892685304 ______ 最大的问题应该是:大肠杆菌是原核生物,动物基因是真核基因,直接用限制酶切获得的基因在大肠杆菌内表达会错误,应该选择动物的相应基因的mRNA反转录得到DNA,或者根据相应蛋白质的氨基酸排列顺序推测DNA的碱基序列获得DNA. 其余的如楼上后面所答.

尚福斌3239各位高手,请教一下,我做质粒的单酶切、与目的片段连接、转化,老是没有菌长,转化过程、感受态没问题, -
松陈珊15892685304 ______ 你确定转化过程和感受态没问题吗?有没有做过平行的其他转化对照?如果别的质粒可以转进去,并且生长,则确实说明你的转化过程和感受态没问题. 如果是这种情况,那么问题有可能是在酶切后回收这一步.回收后的DNA质量直接影响到之后的T4连接酶作用和细菌转化.包括酶切回收buffer没有洗脱干净,或者留有酒精(对连接酶来说是比较致命的一点),或者最后的溶解buffer的酸碱值有问题,都会影响到细菌接受质粒的.建议你重新换一个酶切回收试剂盒.并且每一步都做好平行对照.查找出问题所在. 百替生物专业提供克隆构建服务.有需要也可以寻求公司的帮助.

尚福斌3239大肠杆菌感受态BL21和DH5а区别 -
松陈珊15892685304 ______ DH5α是扩增菌,BL21是表达菌 DH5α可以使质粒高拷贝数扩增,BL21利于蛋白的表达,另外表达菌还有很多,ps系列,roset系列等

尚福斌3239哪些细菌可以制备感受态 -
松陈珊15892685304 ______ 大肠杆菌DH5a 大肠杆菌BL21 这是实验室常用的两种感受态细胞,前者用于扩增质粒,后者用于表达蛋白.

尚福斌3239质粒的转换的方法有哪些?质粒转化后如何筛选? -
松陈珊15892685304 ______ 转化的方法:最常用的是感受态法,包括热激和电转化等,转染不是转化,这是不同的概念.转化后,可以根据质粒上带有的某种特殊基因的表达来鉴定菌落,最常用的有:抗药性基因的表达,比如质粒带有氨苄抗性基因,能在AMP平板上长的一般可以初步判断为转化成功的菌;还有就是显色筛选,比如质粒上的LacZ基因表达,间接促使添加了X-gal的培养基变蓝,绿色荧光蛋白基因表达后菌落发荧光等.

尚福斌3239质粒转化感受态后是否会导致感受态的一些基因扩不出来??? -
松陈珊15892685304 ______ 不会. 除非你的感受态和质粒都是有重组活性的.

尚福斌3239质粒载体倒入原核细胞时为什么要将细胞制备成感受态 -
松陈珊15892685304 ______ 原核细胞正常状态不会主动吸收质粒载体,在感受态时细胞膜通透性增加,通过热击或电穿孔技术使载体进入细胞

尚福斌3239转化超过10kb的质粒用什么菌株的感受态好 -
松陈珊15892685304 ______ 转化超过10kb的质粒用什么菌株的感受态好 (1)质粒DNA的质量和浓度:用于转化的质粒DNA应主要是超螺旋态的,转化率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源DNA的量过多或体积过大时,则会使转化率下降.一般地,...

尚福斌3239stbl3感受态转化用什么培养基平板 -
松陈珊15892685304 ______ stbl3感受态转化用 2YT或LB养基平板.

尚福斌3239当质粒加入宿主细胞进行转化,为什么在涂布含有Amp的LB培养基平板前要在LB培养基 - 37度活化一小时? -
松陈珊15892685304 ______ 一般认为,感受态细胞制备过程和质粒转化过程会使宿主细胞活力受损,所以在转化完后,会在LB培养基中活化一小时,使细胞恢复活力.