质粒转入感受态不长菌

金融界2024年1月19日消息，据国家知识产权局公告，广州达安基因股份有限公司申请一项名为“用于富集微生物的甘露糖结合凝集素融合蛋白的制备方法“，公开号CN117417958A，申请日期为2022年7月。

专利摘要显示，本申请实施例属于病原微生物的高通量测序技术领域，涉及一种用于富集微生物的甘露糖结合凝集素融合蛋白的制备方法，包括构建甘露糖结合凝集素(MBL)氨基酸序列，将MBL氨基酸序列导入载体，得到重组质粒，其中，MBL氨基酸序列修饰有生物素；将重组质粒加入感受态细胞进行转化和质粒提取，得到目标质粒；将目标质粒转入CHO细胞中进行细胞转染，获得细胞表达物；对细胞表达物进行纯化，得到目标融合蛋白。本申请可以提高病原体微生物宏基因组的检测灵敏度。

本文源自金融界

家紫冉4007如何将一个质粒dna转入到大肠杆菌感受态细胞中?并且如何鉴别是否转化成功 -
孙雯享17582804273 ______ 在楼上说的“通常使用选择培养基来筛选大肠杆菌.例如重组质粒上带有抗四环素基因,那么使用带有四环素的选择培养基,将待测大肠杆菌接种到选择培养基,只有成功转入重组质粒的大肠杆菌才能在选择培养基生长”的基础上,也可将待测大肠杆菌接种到另一种抗生素培养基中,转化成功则不长,也是一种加强的反向验证.

家紫冉4007制备感受态细胞时为什么强调无菌操作 -
孙雯享17582804273 ______ 因为感受态细胞转化之后的步骤是复苏,复苏时是不加任何抗生素的,有杂菌也会长起来. 还有就是感受态细胞本来状态就不是太好,在培养的过程中很有可能竞争不过杂菌.

家紫冉4007质粒DNA的转化实验中在含Amp的选择性培养基上实验组和阴性对照都没有菌落出现,这说明什么?原因是什么
孙雯享17582804273 ______ 阴性对照涂布的应该是没有转质粒的空菌吧? 我觉得可能有三个原因: 1,你的amp平板失活,可能是你加抗生素的时候培养基温度太高.如果这样,你的平板就相当于是无抗的. 2,无菌操作失误,带入了其他有抗性的杂菌. 3,你的空菌被转入质粒的菌污染了.或者你的菌本身有污染. 鉴定的方法很简单,重点是你的阴性对照菌.做个菌落pcr看有没有目的带,或者直接挑单菌落用amp培养基(要保证不失活)摇菌过夜看长不长.

家紫冉4007用氯化钙法将质粒DNA转入大肠杆菌实验中,转化成功的关键有哪些? -
孙雯享17582804273 ______ 影响转化效率的因素很多,主要有:感受态细胞制备的质量、受体菌生长期(大肠杆菌在对数生长期易产生感受态)、质粒的大小和构型、所用试剂的纯度、接种前菌种的保藏方式、冰浴时间(延长冰浴时间可略微提高转化率)、器皿的清洁度...

家紫冉4007关于质粒转化
孙雯享17582804273 ______ 1.电击转化时通过瞬时高压使细胞表面出现微小的孔洞,从而使外源DNA能通过孔洞进入到细胞里面,一般适用于革兰氏阳性细菌或者真核微生物; 热激转化是使用钙盐或者镁盐溶液在低温状态下处理细胞使其处于感受态状态,然后通过短时热激使其吸入外源DNA片段,主要应用于革兰氏阴性细菌. 这些我想你应该懂的.我就不赘述了. 2.大肠杆菌作为革兰氏阴性细菌,使用一般的化学转化即热激转化就可以了,为何要劳神费力使用电转化?转化的目的不就是简单而方便为原则么?正所谓杀鸡焉用牛刀? 希望我的回答对你有帮助.

家紫冉4007抗性基因或标记基因在质粒上的话,它怎么起到检验目的基因的作用? -
孙雯享17582804273 ______ 抗性基因或标记基因在质粒上是为了检验质粒是否被转入菌体中.如果你的质粒是已经构建好,而且鉴定正确的,没有空载体质粒,那么,当你转化后,在筛选平板上转化(因为转化不是100%的效率,有些菌是没有质粒转入的),只有转入了...

家紫冉4007质粒的转换的方法有哪些?质粒转化后如何筛选? -
孙雯享17582804273 ______ 转化的方法:最常用的是感受态法,包括热激和电转化等,转染不是转化,这是不同的概念.转化后,可以根据质粒上带有的某种特殊基因的表达来鉴定菌落,最常用的有:抗药性基因的表达,比如质粒带有氨苄抗性基因,能在AMP平板上长的一般可以初步判断为转化成功的菌;还有就是显色筛选,比如质粒上的LacZ基因表达,间接促使添加了X-gal的培养基变蓝,绿色荧光蛋白基因表达后菌落发荧光等.

家紫冉4007质粒转化农杆菌感受态后,挑斑摇菌菌液PCR后无条带.我是加了质粒相应的抗生素的,能长斑不久说明转进去了吗,为什么没条带呢? -
孙雯享17582804273 ______[答案] 质粒转化应该比较容易,要检查一下引物对不对.其次是你的模板够不够,因为农杆菌中质粒拷贝数很低.可以提出质粒后再来PCR

家紫冉4007如何把大肠杆菌中的质粒转入脓杆菌? -
孙雯享17582804273 ______ 首先,你的质粒必须是穿梭质粒,否则不可能转的. 如果是穿梭质粒的话,提取出来直接转化感受态的农杆菌就好. 步骤: 农杆菌感受态细胞的制备 1.挑取少许农杆菌,接种于5ml LB液体培养基 (含50mg/L STR)中,28℃、200r/mim培养...

家紫冉4007转化的感受态有氨苄抗性但是提不出来质粒? -
孙雯享17582804273 ______ 这个问题可以从几外方面着用排查,一个,氨苄是否失效?失一个厂家的或者批次的试一下. 细菌是否产生抗性?我不加质粒,直接用感受态涂板,看是否能长出来. 质粒提取是否出问题了?挑起菌落,去摇菌,而不是用菌落去提质粒. 最后,你是如何知道没有质粒的?电泳检测还是PCR检测?如果电泳检测,可能是质粒含量太低,检测不出来(可以将提出来的质粒重新转化一次,这样会比连接产物的效率高).如果是PCR检测,一个是PCR系统是否正常?另一个,是否提出来的质粒并不是我们克隆进去的质粒(感受态细胞受到质粒污染了).