不同酶的酶切buffer

余芸府831再次请教生物问题 -
万柿凭18286864576 ______ 一般,防止酶切产物自连最常用的就是双酶切,因为产生的粘性末端不同,所以很难发生自连.但实际上最后筛选的时候经常也会出现空载体的情况,这个很大一部分原因是有部分载体没有切动,并不是载体自连的问题.这些没有切动的载体转化率是非常高的,这是转化过程中假阳性的最大来源.载体自连最容易发生的情况有两种,一种是单酶切,一种是平末端连接.这两种情况下,通常为了防止载体自连会对酶切后的载体使用碱性磷酸酶处理,将DNA 5'端的-P基团置换成-OH,这样会一定程度的防止载体自连.

余芸府831双酶切的20μL反应体系和反应时间如何确定?最好是说明原理.所用的酶都是Takara公司的 -
万柿凭18286864576 ______[答案] 模板DNA 几百ng-几ug,区别不大 酶1 0.5ul 酶2 0.5ul buffer 去Takara产品目录查双酶切buffer表,按照那个倍数加,有时候需要BSA 水补足 20ul 30或37度,1-5小时都可以.有个别酶需要55度. 注意,酶别加多了,甘油浓度过高影响酶的活性.反应体系...

余芸府831sall和Ecorl能双酶切吗?酶切体系和条件如何sall和Ecorl能双酶切吗?酶切反应体系和条件如何,想做连接来 -
万柿凭18286864576 ______[答案] 可以,用Takara得酶,缓冲buffer用 一成得buffer H, 其他反映条件同普通反应.我常用50uL反映体系,5ulbuffer 两种酶各1ul,其他得DNA和水补充

余芸府831Takara的NheI 和BamHI双酶切体系表中没有双酶切缓冲体系应该如何选用缓冲液呢?只能进行分步酶切吗? -
万柿凭18286864576 ______[答案] 1、如果你用的是Takara的酶,应该就只能分步了,而且BamHI还是30度反应,虽然也可以在37度切,但如果是分步切的话还是用30度吧. 2、为什么不用NEB的酶呢?可以用buffer1或2同时切(好像是,你需要自己再确认下),而且NEB的这两种酶...

余芸府831用相同的酶双酶切不同的片段,为什么效率会不一样 -
万柿凭18286864576 ______[答案] 酶切位点不同,酶与DNA之间的结合能力不一样,再者键与键之间的势能不一样,酶切的效率自然不同!

余芸府831质粒上一种内切酶的切点只有一个吗?质粒含有多个不同种内切酶的切点? -
万柿凭18286864576 ______ 质粒上的一种内切酶的酶切位点可以有多个,比如T载体上的酶切位点就有重复的,但要看你干吗用了,一般只有一个,如果有多个酶切位点且距离比较远的话就把你的质粒切碎了,质粒上肯定还有多个不同的内切酶位点供选择,只有1个内切酶酶切位点的质粒没什么用处.

余芸府831急!!如何进行部分酶切 -
万柿凭18286864576 ______ 一般在设计酶切位点的时候都是要避开插入片段的上含有的酶切位点的.该回答共有0位秀友支持 回答者:nycmjc【加为好友】【发短消息】【nycmjc的博客】 三级 三星助者 时间:2010-05-25 先连接到克隆载体中,看看克隆载体的多克隆位点...

余芸府831单酶切和双酶切的定义分别是什么?它们有什么不同? -
万柿凭18286864576 ______ 单酶切就是只用一个限制性内切酶去切你的质粒,环状的质粒就成为线状的了,但质粒的大小不变双酶切用两个限制性内切酶,质粒上就产生了两个缺口,环状质粒就变成两段线状DNA了.回收你需要的那一段,因为它的两端和你的目的基因带有互补的黏性末端(当然目的基因也要用这两种酶切才行),在T4DNA连接酶在作用下,它们就连到一起了.你该看看《生物化学》或基因工程方面的书.这都是基本的知识啊.

余芸府831基因工程 目的基因和质粒是否要用同一限制酶进行切割?为什么第一节说要用不同的限制酶切割,而第二节又说用同一限制酶切割?到底是什么呢? -
万柿凭18286864576 ______[答案] 目的基因和质粒要[同时]用同一种限制性核酸内切酶切割,不然就没法连了.但最好用不同的限制酶切两端(切目的基因是不是应该切两下么),防止载体自连或目的基因自连.啊啊,这道题.这题是这样的,你仔细看一下质粒,若用酶...

余芸府83120ul双酶切体系和10ul双酶切体系的区别 -
万柿凭18286864576 ______ 20ul双酶切体系和10ul双酶切体系的区别:DNA的量是3.5微升 1、产物浓度不同 20ul双酶切体系比10ul双酶切体系产物的浓度高. 2、DNA反应量不同 20ul双酶切体系所含DNA要比10ul双酶切体系含有的DNA多,进行双酶切时所要切的DNA量也...