比较qpcr和普通pcr优缺点

薛殃知2191RNA测序到底可不可靠 -
荀盛萧13923036465 ______ (转载) RNA测序在生物科学和医学研究中非常流行,而且正在逐渐走向临床应用.那么RNA测序到底可不可靠呢?由美国FDA牵头的测序质量控制(SEQC)项目对RNA测序的准确性、可重现性和信息含量进行了综合性评估,并将初步调查...

薛殃知2191什么是FQ - PCR与常规PCR的主要区别 -
荀盛萧13923036465 ______ FQ-PCR与常规PCR的主要区别是其在反应过程中加入了荧光染料或荧光基团,可实时监测信号,反应无需电泳检测

薛殃知2191实时荧光定量PCR(qPCR)实现了PCR从定性到定量的飞跃.Taq Man探针是qPCR技术中一种常用探针(如图1),其y末端连接荧光基团(R),3'末端连接淬... -
荀盛萧13923036465 ______[答案] (1)分析图解,Taq Man探针中含有碱基U,说明该探针为单链RNA,而质粒为小型环状DNA,因此与质粒相比,Taq Man探针中除荧光基团、淬灭剂外,特有的化学成分是核糖和尿嘧啶.(2)PCR技术的原理是DNA的双...

薛殃知2191PCR的96孔板与qPCR(荧光定量PCR,real time PCR)的96孔板是一样的吗?RT...或者用普通PCR 96孔板能不能做qPCR实验? -
荀盛萧13923036465 ______[答案] 具体材质有什么不一样不太清楚,但是荧光定量PCR的盖子必须是透明的,不然检测不到信号,至于管子有透明的和不透明的两种,建议使用不透明的,因为荧光染料需要避光.个人觉得最好不要使用普通PCR的96孔板,可能会使结果的扩增效率...

薛殃知2191如何通过qPCR比较不同基因的表达 -
荀盛萧13923036465 ______ 提取样本mRNA,测提取的浓度,按比例调整浓度保持相近的起始量,做反转录合成cDNA,然后用配套的荧光定量试剂配置上样体系,就可以在Real Time-PCR仪上跑了,然后观察仪器上实时显示的数据和最终结果分析比较基因表达差异

薛殃知2191pcr扩增收集的荧光和仪器降温步骤有关吗 -
荀盛萧13923036465 ______ 部分相关. qPCR通常会在反应的退火/延伸阶段收集荧光. 对于SYBR,如果不在此温度下收集荧光,无法得到扩增曲线. 而对于Taqman等水解探针法,则未必一定要这个温度收集荧光(虽然通常也是55~60℃收集荧光).

薛殃知2191实时荧光定量PCR与普通PCR的区别是什么?结果有何异同?能说明的问题是什么? -
荀盛萧13923036465 ______ 原理不同:荧光定量pcr实时监测与dna结合的荧光染料激发的荧光;普通pcr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量,一般是紫外光. 反应要求:荧光定量对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp;普通定量可以扩增长点的片段.如果不需要检测产物分子量大小,荧光定量可以不进行电泳就对产物进行定量分析,普通pcr必须电泳. 结果:荧光定量可以实现精确定量,普通pcr则不行.荧光定量体现可以看到整个扩增过程,可以看到扩增效率,溶解温度,直接得到的标准曲线等,这些是普通pcr无法实现的. 如果还不清楚建议去丁香园等网站逛逛,希望可以帮到你

薛殃知2191如何绘制表达谱并验证 -
荀盛萧13923036465 ______ Q1:你使用什么方法来确保灵敏而特异的miRNA表达谱?为什么?Galina Gabriely(哈佛大学) 我们通常利用多重定量pcr来对少量的人miRNA进行小规模图谱分析.这种方法的灵敏度和特异性比芯片更好,因此在待分析miRNA数量不多时是首...

薛殃知2191什么是实时荧光定量PCR?有什么应用领域?与传统PCR有什么区别? -
荀盛萧13923036465 ______ .荧光共振能量传递 (FRET) 某荧光标记基团在激发光刺激下生成某波长的发射光,当另一屏蔽基团与其距离合适时,原发射光将会被屏蔽基团所吸收,并转化为其他波长的发射光或热能,称之为FRET.2.荧光化学:荧光定量PCR所使用的荧...