液相色谱图纵坐标单位

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液相色谱图纵坐标单位

来源：baiyundou.net 日期：2024-07-19

蛋白由若干氨基酸脱水缩合排列构成，含有一个游离的氨基（N端）和一个游离的羧基（C端）。C端与N端一样，在蛋白质分子结构分析中具有重要的地位，是蛋白质完整一级结构的必须信息，对C端序列进行测定具有重要的意义。

北京百泰派克生物科技有限公司基于CNAS/ISO9001双重质量认证体系，根据肽图分析（质谱法）原理，建立了针对于不同类别生物制品的蛋白C端序列分析服务，可实现对蛋白、抗体、疫苗、多肽、重组胶原蛋白等生物制品C端序列的测定。

技术原理

目前尚未开发出类似于Edman降解的C端序列测定技术，因此蛋白C端序列的确证服务仍然是以质谱平台为基础。根据靶蛋白理论序列信息选择互补性好的两种蛋白酶酶切蛋白，产生两个长度不同但是适宜离子化的C端肽段，经质谱检测，相互验证，最终确定蛋白C端序列。

附常见蛋白酶酶切条件及位点：

实验仪器

• 纳升级高效液相色谱仪：Easy-nLC 1200；

• 组合型四极杆-Orbitrap质谱仪：Q Exactive™ Hybrid Quadrupole-Orbitrap™ Mass Spectrometer。

案例示意

样品蛋白经过适合的蛋白酶酶切之后变成长度大多在6-28aa的肽段，进入质谱分析后产生的总离子流谱图如下：

样品总离子流谱图（TIC）

（横坐标为时间（min），纵坐标为相对信号强度）

通过一级质谱图可以得到完整肽段的分子量，mass=(m/z-1)*z

C端肽段一级质谱图

（横坐标为检测到的m/z值，纵坐标为相对信号强度）

二级质谱图得到的是肽段的碎片离子m/z值，完整肽段在质谱中从肽键位置被打碎为碎片离子，靠近肽段的N端的为b离子，靠近C端的为y离子（例如二级图中的肽段KTSTSPLVKSF, 二级碎裂之后，碎片离子K和TSTSPLVKSF分别为b1和y10离子，碎片离子KT和STSPLVKSF分别为b2和y9离子）。理论的碎片离子m/z与实际二级图中的检测值匹配到的越多，可信度越高。通过肽段二级碎裂片段信息确定C端肽段序列

肽段二级质谱图

（横坐标为检测到的m/z值，纵坐标为相对信号强度）

实际项目中会至少使用两种互补的蛋白酶对靶蛋白进行酶切，可以得到两条长度不同的C端肽段，通过对于两条C端肽段序列的相互验证，最终确定蛋白的C端序列信息。

常见典型问题

问题1：蛋白经过酶切后会在固定的位点断开，如何确定C端的肽段就是蛋白C端呢？

回答：数据分析的时候会挑选N端为酶切位点而C端不是酶切位点的肽段，保证肽段是酶切形成的而不是随机的杂质肽段，同时保证肽段末端与对比末端是统一的。

问题2：如果分析结果只有C末端为酶切位点的肽段，如何进步确认C端具体位置？

回答：这种结果通常是两种情况造成的。第一种情况是蛋白的C端正好是酶切位点，我们可以通过不同酶切同时分析排除这种情况。第二种是蛋白C端离该酶切位点很近或很远，酶切之后剩余片段太短或太长，碎裂情况太差，无法被分析软件识别到，我们可以建立一个梯度数据库，每个序列比上一下序列多一个氨基酸，利用梯度数据库重新比对分析。

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朱谈齐4800请问HPLC色谱图的纵坐标代表什么意思(纵坐标显示LU),是Agilent公司1200型高效液相色谱仪,荧光检测器,
周伦栋17829373760 ______ Luminous,应该是发光强度

朱谈齐4800气相色谱图与液相色谱图有什么区别? -
周伦栋17829373760 ______ 区别两者,应该看看纵坐标的标志,液相的一般为紫外吸收,一般不大于10,而气相的则是电压,一般为几百所以两者很容易分辨的

朱谈齐4800主成分分析液相色谱图的碎石图纵横坐标值是什么 -
周伦栋17829373760 ______ 我只知道,主成分分析的碎石图. 横轴是主成分的个数,纵轴是特征值(具体啥含义不用纠结). 有条虚线是随机数模拟计算出的特征值. 此图用来确定主成分个数,虚线之上的主成分保留,特征值大于1的保留,最大拐点之上的保留.

朱谈齐4800气相色谱里的色谱峰纵坐标代表什么啊 -
周伦栋17829373760 ______ 纵坐标代表的东西因检测器不同而不同.其实它所代表的物理量对於分析来说并没有实际作用,因为对於同一种物质用不同检测器对其检测,得到的纵坐标的值必然不同,且单位不同.有用的仅是其数值,用於计算峰高或峰面积.然后通过标准曲线进行计算.如果你非要知道纵坐标是什麽意思,请先告知你的检测器是什麽.

朱谈齐4800色谱峰面积单位?
周伦栋17829373760 ______ 这个不好说,它纵坐标是电压,横坐标是时间,确定不了,鉴于它的数值大,那就按平方毫米算.

朱谈齐4800制作气相色谱标曲时,得到的纵坐标峰面积有单位么?画图时纵坐标就写峰面积么? -
周伦栋17829373760 ______[答案] 在色谱图中: 纵坐标表示响应值,单位有各种表示方式:mV,mA,pA等横坐标是时间单位:min. 峰面积有没有单位,对结果没有影响.他体现的就是一个数值.

朱谈齐4800什么是总离子流色谱图液质联用的总离子流色谱图,横坐标出峰时间,纵
周伦栋17829373760 ______ 严格来说应该叫总离子流图,已经不是色谱图了,呵呵.纵坐标高还是代表物质总生的总离子信号,和色谱峰面积比例接近,当然也有时有离子流峰不一定有色谱峰,特殊情况也很多.一个总离子流图由好多峰组成,这些峰出峰先后是按色谱出峰先后顺序排列的.在同一峰,又由好多不同质荷比的碎片组成,在质谱中,同一个离子流峰中不同的质荷比的碎片也按小到大的顺序先后检测到,形成质谱图. 离子流图的一点和质谱图的某一点都不一定是纯的,因为存在色谱分离度和质谱分辨率的问题.色谱柱效足够高,分析方法足够好,总离子流图一个点的物质就越来越单一,分辨率越高质谱图某一点的峰纯度也越高.

朱谈齐4800请问纵坐标CPS,和横坐标B.E(eV)分别表示什么?怎样从图上计算各物质的含量? -
周伦栋17829373760 ______[答案] 纵坐标响应值代表顺物质时浓度横坐标保留时间其实就是时间轴而已通过峰的面积来计算含量这个计算机应该都能算的出来气相如果是比较落后的液相你就要积分去算了,很麻烦

朱谈齐4800色谱常用符号????
周伦栋17829373760 ______ <<常用术语>> N':噪音(式3.3,图3.3) NARP:非水反相HPLC NPC:正相色谱 P:色谱柱压力降(通常以psi表示)(式2.9) pKa:酸或供质子碱的酸性常数 PAH:多环芳烃(polyaromatic hydrocarbon) RS:分离度(式2.1) RI:...

（编辑：自媒体）