菌液pcr后什么都没有

智通财经APP讯，凯普生物(300639.SZ)公告，公司全资子公司潮州凯普生物化学有限公司取得国家药品监督管理局批准的《医疗器械变更注册(备案)文件(体外诊断试剂)》。公司“高危型人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)”率先获批增加宫颈癌初筛、宫颈癌联合筛查和ASC-US人群分流预期用途。

项泄宁3465单克隆验证,菌液PCR有目的条带的位置,但是质粒PCR后,却没有批出我的目的条带这是为什么呀 谢谢 -
孙卢洁13834402086 ______ 如果PCR系统没有问题,很可能是质粒和染色体发生了重组.建议提细菌的genome DNA 做一次PCR.如果是阳性,就说明是这样. 另外,还可以另挑几个菌落,重新提质粒扩增.

项泄宁3465菌液PCR可靠吗 -
孙卢洁13834402086 ______ 不知道您做菌液PCR的目的是什么.如果是鉴定构建好的克隆或者亚克隆,那么菌液PCR就完全没有问题.PCR体系也可以小一些,只要注意,菌液的量一定不能过多,一般10ul的PCR体系中,加入过夜培养的菌液0.5ul就可以了.或者不用那...

项泄宁3465菌液pcr可以拉出目的条带,但是质粒抽出来酶切结果说是没有插进去,为什么?
孙卢洁13834402086 ______ 能确定菌液pcr出来的就是目的条带吗?如果确定,那就是可能质粒抽提和酶切这两步出了问题

项泄宁346516SDNA测序问题 -
孙卢洁13834402086 ______ 空载,一个是没有片段插入.一个是培养过程中片段丢失.第二种不需特殊条件培养一般发生的可能性比较小.PCR鉴定易受外界环境条件影响,一般建议使用酶切鉴定.假如酶切鉴定没有问题那您可以使用扩增引物测序或者目的片段上引物进...

项泄宁3465转化后菌液pcr有目的条带,然后提质粒和双酶切验证.但是没有得到目的条带. -
孙卢洁13834402086 ______ 我觉得用elution buffer没太大的影响,如果你非要觉得不好的话,只能在转化一遍重新提质粒或者抽成干粉再加水.我们一般用水就行.实在不行去测序呀. 提的质粒和空质粒可以比较,如果你插入的基因足够大,实在不行多跑跑.然后看大小比较. 酶切的话还是要看你的酶的活性.要是快切酶的话只要五分钟,要是慢的话要三四个小时.(我用的是takara的) 是不是你酶切的量太少了,我一般50ul的体系要酶切1ug以上的,还要多跑跑,跑个十分钟以上吧. 我也做了个克隆用了很长时间,实在不行就买点贵的酶,能保证一次成功呀.

项泄宁3465为什么菌液PCR 引物一个载体上的 一个是PCR片段上的 鉴定正确后 测序却完全不同?信号中断?
孙卢洁13834402086 ______ 是定向克隆粘末端连接?如果不是有连接反了的可能 再有一种可能就是送去测序的菌液有问题 我有次是同样的片段测序,菌液没出来,用测序引物PCR的产物测序就合适了,可能菌液污染了

项泄宁3465我的目的片段连载体后,挑单克隆摇菌,用菌液PCR,没有条带.为什么啊? -
孙卢洁13834402086 ______ 假阳性1.平板是否加抗性?2.引物设计是否有问题?3.载体自连现象是不是很严重?建议做个对照4.菌落pcr条件是否合适?

项泄宁3465最近做菌液pcr条带弥散,也看不见目的条带,求解 -
孙卢洁13834402086 ______ 由图可见该结果,因为你的PCR条件的退火温度从高到低均有条带出现,所以最有可能是 1. 引物特异性较差引起的; 2. 挑取的不是你的目的菌株,是别的杂菌,所以测不出来; 3. 可能在你培养菌过程中染菌(污染)了

项泄宁3465冻存管中的菌体提基因组会影响pcr吗 -
孙卢洁13834402086 ______ 不会的,如果保存不错的话,仅仅是会降低细菌活性,但通过pcr,完全可以扩增出更多,不受影响.一般冷藏的菌液时间久了会失活,所以一段时间后要重新摇菌筛选.

项泄宁3465用菌斑跑PCR有目的条带,用菌液怎么就跑不出?
孙卢洁13834402086 ______ 就只是你的目的基因菌液PCR扩增不出来么? 不过我觉得你如果质粒、电泳、菌落PCR都能验证的话,菌液PCR结果如何都意义不大了.