菌液pcr检测详细步骤
“红管管，白签签，大家一起做核酸。”在群众眼中，核酸检测很简单，只有两步：扫码采样和查询报告。但事实上，这在常人眼中看似简单的两步背后，却凝聚着核酸检测人员不为人知的辛苦付出。今天，我们就来一起探访宁津县人民医院检验科PCR实验室，带大家了解核酸检测人员的工作。
核酸检测人员是抗疫战中的排雷兵，每天与新冠病毒正面 “交锋”。进入实验室之前，他们必须全身“武装”，N95口罩、防护服、护目镜、防护面屏、双层手套、防水靴套等用品的穿戴必须执行严格要求，容不得一丝马虎。
“实验室里检验人员每天要不断重复着样本核对签收、样本灭活、手工加样、核酸提取、上机扩增、结果分析、出具结果报告等多个步骤，整个过程环环相扣，都只能纯手工操作，一个动作甚至需要重复上千次。”宁津县人民医院检验科检验技师武雅茹说。
只要进入实验室，检验人员不喝水、不进食、不如厕，一直坚持到检验完成。加上防护服密不透风，工作时间又长，每轮实验下来，都是对检验师体力和意志力的双重考验。
在PCR实验室，这个被称为“距离病毒最近的地方”，一份份核酸检测结果从这里出来。这里有一群抗疫“幕后无名英雄”，核酸检测实验室是他们的战场，他们默默地坚守着自己的岗位，履行着自己的职责和使命。
宁津县人民医院检验科主任陈春杰说：“我们检验科下设6个分组，包括分子组（PCR实验室）、临检组、生化组、免疫组、微生物组、艾滋病筛查组，总共有26名工作人员，其中PCR实验室6人，分为两班，白班和夜班，每个班次12个小时，这次核酸检测我们负责检测部分乡镇送来的核酸样本以及本院的医务人员和患者、陪人样本，愿检尽检样本，院外环境、重点场所环境样本，承接德城区样本，最高的时候一次接收达到4000多管。标本量多的时候，检验科全体人员24小时在岗在位，随时调整工作班次，科室还抽调了5人外出支援，所以很多时候都是其他小组做完日常检测工作后紧接着就去PCR实验室，中间只有30分钟吃饭时间。但我们不是在孤单奋斗，在医院和输血科、病理科等兄弟科室的大力支持下，我们确保了核酸结果及时准确地发出。8月28日以来，共检测核酸样本8000多管，共计17万人次。”
在宁津县人民医院核酸检测实验室，有三个功能分区，一区负责试剂的准备和实验耗材，二区负责接收标本、拆包、排板、编号、加样、扫码等，三区是扩增分析区。核酸检测的每一步都需要人工操作。从开箱拿出采样管，到核酸提取、体系配置、扩增检测、结果分析等，每个看起来有条不紊的操作程序背后，都充满了高度风险。检验师杨璐瑶与同事们穿着白色防护服，和病毒面对面、“零距离”接触，小心翼翼，全力筑牢生命安全防护线。
杨璐瑶：“穿上防护服的那一刻，就会有一份责任，就是这份责任让我们认真对待每一份标本，将标本精准高效地检测出来。”
一份“阴性”的核酸检测报告，是老百姓心中的一颗定心丸，更是宁津县打赢疫情防控的最大动力。一份份样本、一组组数据，筑起一道道病毒“防火墙”，宁津县人民医院马力全开单日最高检验核酸数可达6.4万人，用无畏姿态诠释了宁医人的担当！ （陈伟伟）
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令房雄3040手工法 革兰阴性菌总DNA提取模板做PCR 经验方法 -
文郊薇15166094499 ______ 质粒的方法就溶液123的方法就可以了 DNA可以参考提取动物、植物DNA的方法 更快速的方法可以参考我们做菌落pcr的方法,这个方法是采用少量的菌作为模板 然后加入pcr反应液,在pcr高温预变性的过程中菌细胞壁会裂解掉,dna和质粒都释放到溶液中作为模板参与扩增. 如果你有96孔深板(1-2ml)以及排枪最好了,省事省时.牙签或者枪头挑菌挑一点点(只要沾到菌落就行,不要求大块,大块反而不好),96孔每孔加500ul培养液,挑96个,然后拿去摇菌,培养3-5小时,菌液就可以直接作为pcr的模板了. 只要引物好用,基本都可以扩出来的.我们鉴定阳性克隆都这样做, 你可以参考
令房雄3040菌液直接PCR
文郊薇15166094499 ______ 其实你原体系中7微升都太多了.我做50微升体系最多加3微升模板. 菌液PCR只需要用枪头沾取菌落,或者加入2微升左右菌液即可.预变性时间可稍微延长.如果引物特异性好的话,和用DNA模板效果差不多.
令房雄3040菌液PCR可靠吗 -
文郊薇15166094499 ______ 不知道您做菌液PCR的目的是什么.如果是鉴定构建好的克隆或者亚克隆,那么菌液PCR就完全没有问题.PCR体系也可以小一些,只要注意,菌液的量一定不能过多,一般10ul的PCR体系中,加入过夜培养的菌液0.5ul就可以了.或者不用那...
令房雄3040军团菌PCR鉴定,为什么要进行核酸的提取?他的步骤是怎样的?
文郊薇15166094499 ______ 不管是什么菌,进行PCR都是以核酸为模板的,所以要提取核酸,提取细菌DNA的方法一般是煮沸裂解法,配个DNA提取液煮一煮就行.
令房雄3040回答下列有关生物技术实践的问题.(1)PCR的反应过程包括___三步.整个PCR反应过程中需要适宜的温度和酸碱度,前者由PCR仪自动控制,后者需靠___... -
文郊薇15166094499 ______[答案] (1)PCR的反应过程包括变性、复性和延伸三步.整个PCR反应过程中需要适宜的温度和酸碱度,前者由PCR仪自动控制,后者需靠缓冲液来维持.(2)培养基的营养成分一般包括水、无机盐、碳源和氮源,如培养基中的蛋白胨...
令房雄3040什么是PCR实验 -
文郊薇15166094499 ______ PCR是一种体外DNA 扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物延伸”三...
令房雄3040什么是免培养法鉴定菌种?具体步骤是什么?
文郊薇15166094499 ______ 是不是就是指PCR啊,这是比较快捷的方式了 这个的话假如是鉴定质粒之类的话直接挑些菌落,代替模板到PCR体系中,混匀PCR就好了, 假如只是个单独的菌种的话,那你就抽点基因组什么的直接P就可以了,具体还要看你做什么了吧.
令房雄3040植物基因组DNA可用植物根提取吗?具体步骤如何 -
文郊薇15166094499 ______ 植物组织提取基因组DNA 一、材料 幼嫩叶子. 二、设备 移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,陶瓷研钵,50ml离心管(有盖)及5ml和1.5ml离心管,弯成钩状的小玻棒. 三、试剂 1、提取缓冲液Ⅰ:100mmol/L Tris·Cl, pH8.0, ...
令房雄3040PCR做菌液筛选,只有阳性对照有条带,最可能的原因是什么? -
文郊薇15166094499 ______ PCR没有结果有很多原因,你作阳性对照应该是用原来的基因,模版是质粒还是cDNA?如果菌液PCR没有结果,建议按照以下程序排查:1.摇菌是否出了问题.2.菌液PCR前菌液破裂措施做是否充足.3.PCR过程有没有问题,引物设置,菌液的量的控制. 做个双酶切对照,如果还没有,重做吧兄弟
令房雄3040尿液细菌学检查方法有哪些?
文郊薇15166094499 ______ (1) 直接涂片检查:取混匀新鲜尿涂片,健康人的尿涂片 无细菌.若每个油镜视野下... 近年常用聚合酶链反应(PCR)方法,使含微量结 核菌DNA扩增,40条结核菌即可有...