质粒dna的酶切实验原理

磁珠质粒提取试剂盒

产品简介：

采用优化的 SDS-碱裂解法裂解细胞，高效去除抑制物等杂质，羟基磁珠能在高盐、低 pH

值状态下与溶液中的核酸通过疏水作用、氢键作用和静电作用等发生特异性结合，而不与其

他杂质（蛋白质）结合，迅速从样品中分离质粒 DNA。纯化的质粒 DNA 可直接用于酶切、

PCR、测序、连接、转化、转染一些常规的传代细胞等生物学实验。

产品内容：

储存条件：

RNase A，-30 ~ -15 ℃保存，干冰运输；

羟基磁珠 2 ~ 8 ℃保存，室温运输；

其他组分 15 ~ 25 ℃保存，室温运输。

使用步骤：

1、取 5-10 mL 过夜培养菌液加入离心管中，12000 rpm 离心 2 min 收集菌体沉淀，尽量吸弃

上清。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入 250 μL Buffer P1（已加入 RNase A），使用移液枪或涡

旋振荡器充分混匀，悬浮菌体沉淀，确保无菌块。37 ℃静置 15 min，以除去 RNA。

3、向离心管中加入 250 μL Buffer P2，温和上下颠倒混匀 4-6 次，充分混匀使菌体裂解，此

时溶液应变得清亮粘稠。

注意：温和地混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组 DNA。所用时间不应超过 5 min，以免质粒受到破坏。

4、向离心管中加入 350 μL Buffer P3，立即温和上下颠倒混匀 8-10 次，充分混匀，此时应

出现白色絮状沉淀，12000 rpm 离心 10 min。

注意：P3 加入后立即混合，避免产生局部沉淀。如果离心完仍有沉淀漂浮，可延长离心时间取上清。

5、将步骤 4 中的上清液转移到新的 2 mL 灭菌离心管中，加入等体积异丙醇，混匀，加入50 μL 羟基磁珠，颠倒混匀 1 min，室温放置 2 min。

6、将步骤 5 中的离心管放在磁力架上静置，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。

7、将离心管从将离心管从磁力架上取下，加入 600 μL Buffer PW（请确认是否加入无水乙

醇），混匀 2 min。

注意：加入漂洗液 PW 后，室温静置 2 min，有助于更好的去除杂质。

8、将离心管放置于磁力架上静置，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。

9、将离心管从磁力架上取下，加入 600 μL Buffer PW，混匀 2 min。

10、将离心管放置于磁力架上静置，磁珠完全吸附后，弃废液，吸尽管底管盖的液体。

11、将离心管置于磁力架上，室温晾干 15 min。

注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间，以免难

以洗脱质粒 DNA。

12、将离心管从磁力架上取下，加入 100-200 μL 洗脱缓冲液 TB 或 ddH2O（洗脱液可在水浴

锅中预热），振荡混匀，置于 56 ℃水浴锅中，孵育 10 min，期间每隔 2 min 颠倒混匀。

13、将离心管放置于磁力架上，磁珠完全吸附后，小心将质粒 DNA 溶液转移至一个新离心

管中，并于-20℃保存。

注意事项：

1、使用前请短暂离心 RNase A，将试剂盒提供的 RNase A 溶液全部加入 Buffer P1 中，置于

4℃保存。

2、羟基磁珠置于 4℃保存，振荡混匀后再使用。

3、首次使用前按 Buffer PW 瓶子标签所示，加入适量的无水乙醇稀释 Buffer PW，于室温保

存。

4、若低温保存时，Buffer P2 和 Buffer P3 溶液容易产生白色沉淀，使用前可室温放置一段时

间，必要时可在 37℃水浴锅中预热至沉淀完全溶解，混匀后再使用。

5、处理低拷贝质粒时，提高菌液的用量，并按比例扩大 Buffer P1、Buffer P2 和 Buffer P3

的用量。

6、使用 Buffer P2、Buffer P3 和 Buffer PD 应戴手套，使用后应立即盖紧盖子。

7、自备试剂：异丙醇、乙醇。

蒙毕冠4865高一生物,急急急!!! -
丰贡终17156489121 ______ 在特定的限制酶切割下,露出黏性或非黏性末端,与在限制酶的切割下露出同样的黏性或...

蒙毕冠4865目的基因与质粒重组 -
丰贡终17156489121 ______ 目的基因就是含有我要的那个DNA片段,当然还有其它无关片段,与质粒重组的后叫重组质粒.限制性内切酶不可能就刚好切出需要基因,少切了会破坏需要基因,多切了倒可以,只要有需要基因就能表达出相应产品.

蒙毕冠4865DNA酶切及凝胶电泳的基本描述 -
丰贡终17156489121 ______ 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA.它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在.Ⅰ类酶结合于识别位...

蒙毕冠4865质粒的提取原理 -
丰贡终17156489121 ______ 质粒提取是指去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒. 目录 一、质粒提取原理 质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA,是进行DNA重组的常用载体.作为一个具有自身复制起点的复制单位...

蒙毕冠4865有一环状dna上有三个同一种酶的切点,问最多有几种片段 -
丰贡终17156489121 ______ (1)质粒切割前是双链环状DNA分子,所有磷酸基团参与形成磷酸二酯键,故不含游离的磷酸基团.从图1可以看出,质粒上只含有一个SmaⅠ的切点,因此被改酶切割后,质粒变为线性双链DNA分子,因每条链上含有一个游离的磷酸基团,因此...

蒙毕冠4865碱法提取质粒中,基因组dna和蛋白质怎样被去除,其原理何在 -
丰贡终17156489121 ______ 现质粒提取论手提试剂盒其根本原理碱裂解:菌体NaOH SDS溶液裂解蛋白质与DNA发变性加入液质粒DNA能够迅速复性呈溶解状态离留清;蛋白质与染色体DNA变性 呈絮状离沉淀 进步质粒DNA获取手提经苯酚、氯仿抽提RNA酶消化乙醇沉淀 等简单步骤除残余蛋白质RNA及盐试剂盒则基础使用DNA吸附柱吸附质粒DNA洗脱质粒 评价:一通琼脂糖电泳检查所获质粒(准确需酶切)细菌基组DNARNA污染及质粒断裂少同根据marke量品进行致浓度定量; 二通紫外光光度计测定品OD二吧0OD二陆0计算其比值衡量品纯度经验值:纯DNA:OD二陆0/OD二吧0≈一.吧(>一.9,表明RNA污染;

蒙毕冠4865基因工程使用双酶切和单酶切 -
丰贡终17156489121 ______ 双酶切之后,由于用的两种酶切出来的粘性末端序列不一样,所以一般载体不会再自连.而你说的载体和基因片段再重新连起来,也是不太可能的,因为连接反应是需要ATP提供能量的,酶切体系里面没有ATP,所以不会再连接. 质粒切开后,一般是通过琼脂糖凝胶电泳的方法,把大小不同的两个片段分离开,然后把想要的片段通过切胶回收提纯的方法得到.

蒙毕冠4865这个提质粒DNA的原理是什么? -
丰贡终17156489121 ______[答案] 这些东西后面都灭活了,不影响你后面的实验,应该没关系zltj2008(站内联系TA)这应该不是正规专门提质粒的方法,这种方法就是把菌体裂解开,把包括基因组DNA和质粒DNA都释放出来,电泳时应该都可以看到,然后可以做PCR检测或酶切....

蒙毕冠4865中什么切割质粒什么切割目的基因,...
丰贡终17156489121 ______ 降低了环化可能. 如果切割位点为A-B-B之流, 那仍旧可能自发环化. 但位点由我们选择, 可以规避以上情况.

蒙毕冠4865现在有哪些方法可以用来在体外连接DNA片段?
丰贡终17156489121 ______ 4.1.1 DNA的连接策略质粒 具有稳定可靠和操作简便的优点.如果要克隆 较小的DNA片段( 外源DNA片段和质粒载体 的连接反应策略有以下几种:(1)互补性粘性末...