质粒dna的酶切实验结果

磁珠质粒提取试剂盒

产品简介：

采用优化的 SDS-碱裂解法裂解细胞，高效去除抑制物等杂质，羟基磁珠能在高盐、低 pH

值状态下与溶液中的核酸通过疏水作用、氢键作用和静电作用等发生特异性结合，而不与其

他杂质（蛋白质）结合，迅速从样品中分离质粒 DNA。纯化的质粒 DNA 可直接用于酶切、

PCR、测序、连接、转化、转染一些常规的传代细胞等生物学实验。

产品内容：

储存条件：

RNase A，-30 ~ -15 ℃保存，干冰运输；

羟基磁珠 2 ~ 8 ℃保存，室温运输；

其他组分 15 ~ 25 ℃保存，室温运输。

使用步骤：

1、取 5-10 mL 过夜培养菌液加入离心管中，12000 rpm 离心 2 min 收集菌体沉淀，尽量吸弃

上清。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入 250 μL Buffer P1（已加入 RNase A），使用移液枪或涡

旋振荡器充分混匀，悬浮菌体沉淀，确保无菌块。37 ℃静置 15 min，以除去 RNA。

3、向离心管中加入 250 μL Buffer P2，温和上下颠倒混匀 4-6 次，充分混匀使菌体裂解，此

时溶液应变得清亮粘稠。

注意：温和地混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组 DNA。所用时间不应超过 5 min，以免质粒受到破坏。

4、向离心管中加入 350 μL Buffer P3，立即温和上下颠倒混匀 8-10 次，充分混匀，此时应

出现白色絮状沉淀，12000 rpm 离心 10 min。

注意：P3 加入后立即混合，避免产生局部沉淀。如果离心完仍有沉淀漂浮，可延长离心时间取上清。

5、将步骤 4 中的上清液转移到新的 2 mL 灭菌离心管中，加入等体积异丙醇，混匀，加入50 μL 羟基磁珠，颠倒混匀 1 min，室温放置 2 min。

6、将步骤 5 中的离心管放在磁力架上静置，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。

7、将离心管从将离心管从磁力架上取下，加入 600 μL Buffer PW（请确认是否加入无水乙

醇），混匀 2 min。

注意：加入漂洗液 PW 后，室温静置 2 min，有助于更好的去除杂质。

8、将离心管放置于磁力架上静置，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。

9、将离心管从磁力架上取下，加入 600 μL Buffer PW，混匀 2 min。

10、将离心管放置于磁力架上静置，磁珠完全吸附后，弃废液，吸尽管底管盖的液体。

11、将离心管置于磁力架上，室温晾干 15 min。

注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间，以免难

以洗脱质粒 DNA。

12、将离心管从磁力架上取下，加入 100-200 μL 洗脱缓冲液 TB 或 ddH2O（洗脱液可在水浴

锅中预热），振荡混匀，置于 56 ℃水浴锅中，孵育 10 min，期间每隔 2 min 颠倒混匀。

13、将离心管放置于磁力架上，磁珠完全吸附后，小心将质粒 DNA 溶液转移至一个新离心

管中，并于-20℃保存。

注意事项：

1、使用前请短暂离心 RNase A，将试剂盒提供的 RNase A 溶液全部加入 Buffer P1 中，置于

4℃保存。

2、羟基磁珠置于 4℃保存，振荡混匀后再使用。

3、首次使用前按 Buffer PW 瓶子标签所示，加入适量的无水乙醇稀释 Buffer PW，于室温保

存。

4、若低温保存时，Buffer P2 和 Buffer P3 溶液容易产生白色沉淀，使用前可室温放置一段时

间，必要时可在 37℃水浴锅中预热至沉淀完全溶解，混匀后再使用。

5、处理低拷贝质粒时，提高菌液的用量，并按比例扩大 Buffer P1、Buffer P2 和 Buffer P3

的用量。

6、使用 Buffer P2、Buffer P3 和 Buffer PD 应戴手套，使用后应立即盖紧盖子。

7、自备试剂：异丙醇、乙醇。

虞定淑1482(2014•金山区一模)图一为含有目的基因的DNA(外源DNA),图二为某质粒,表中是几种限制酶识别序列及其切割位点.用图中的外源DNA与质粒构建重组... -
俞宋苏15067192952 ______[答案] (1)质粒切割前是双链环状DNA分子,所有磷酸基团参与形成磷酸二酯键,故不含游离的磷酸基团.从图1可以看出,质粒上只含有一个SmaⅠ的切点,因此被改酶切割后,质粒变为线性双链DNA分子,因每条链上含有一个游离的磷酸基团,因此切割...

虞定淑1482质粒DNA提取及电泳分析实验结果图的分析,希望各位大侠尽力帮忙哦 -
俞宋苏15067192952 ______ 1,虽然不知道你点了多少,如果是1ul,2ul,这个质粒的提取量也就还行,就我的感觉,应该在200ng/ul的浓度或更高(看你点了多少样); 2,不告诉大家你用的marker,分子量试不好说的,更何况,你没酶切过,用质粒与线性的Marker比较没有任何意义.纯度也没什么大问题,质粒提取出现3条是最正常的,4条带表明有基因组DNA污染,但你的这个带很弱,问题不大;稍有疑问的是,你主带的下方还有1,2条更小的带,如果排除电泳污染的话,应该是不同程度的超螺旋所致. 这个提取的质粒,酶切,转化都没问题的.

虞定淑1482DNA酶切后电泳,条带呈复带的原因做双酶切,跑出来每个带都像一个“=”,都分别由两个极近的带组成.求可能的原因 -
俞宋苏15067192952 ______[答案] 你酶切的DNA是什么? 质粒的话,双酶切中间有几十bp以上,切出来的条带就是两条,这个你应该能判断的. 如果是pcr产物酶切出现了两条极近的带,那么很有可能是因为pcr产物纯化时有杂带污染,一开始跑胶的时候看不出来,后来你回收浓缩再...

虞定淑1482质粒pcr结果很好,为什么酶切却做不出来 -
俞宋苏15067192952 ______ 质粒pcr结果很好,为什么酶切却做不出来 既然你的质粒已经提出来了,那么感受态、转化等因素就不必再考虑了. 你看看双酶切后载体的位置有几条带,如果是两条,那说明酶切不完全,如果是一条,那说明酶切效率没问题. pET28a分子量为5.6k,你的插入片段为500bp,如果你的质粒完全切开,载体和插入片段的摩尔比为1:1,质量比就是5.6k:0.5k,跑胶后两条带的亮度比就是10:1,所以你目的条带很淡非常正常. 换句话说,你的实验一切正常,那条500bp的条带可能本来就应该那么淡.

虞定淑1482酶切产物电泳检测无条带这是怎么回事? -
俞宋苏15067192952 ______ 建议你做如下改进: 1. 原始质粒上样2ul,电泳检测,确定质粒质量没问题; 2. 所有酶切体系均改为10ul,其中质粒2ul,酶0.1ul (双酶切时另一种酶也加0.1ul ),buffer终浓度为 1*,剩下为去离子水.酶切时间为4小时左右. 3.电泳用的凝胶最好为新鲜配制的,浓度视质粒大小而定,一般为1%; 电泳的缓冲液最好也是新鲜配制的,电泳电压适当. 1KB的条带拖尾严重,可能是凝胶不新鲜,或者是电泳时电压过高,或者是酶切时间过长.上述建议中已经给出解决方法. 至于你说的奇怪现象,可能质粒已经降解,也可能是酶切过久导致降解,也可能是枪头或者离心管等器材污染,总之保证一切是新鲜的,再做一次.

虞定淑1482质粒DNA、酶切产物的片段大小应该为多少. -
俞宋苏15067192952 ______ 单酶切会把质粒线性化,一个带,质粒有多大就该是多大.双酶切切出片段大小是两个酶切位点之间的长度,看你用的什么酶了.

虞定淑1482切割质粒的酶是什么 -
俞宋苏15067192952 ______ 具有相同的粘性末端的两条dna链在连接酶的作用下相连.只有一种酶切时,切出的粘性末端相同,让目的基因和质粒相连接即可,但是由于是混合,连接的结果不尽相同.dna连接酶将目的基因和质粒粘性末端的3-5磷酸二酯键连接起来,碱基之间的氢键自动连接.是两个目的基因都连接上么?那个应该有前提的,有了前提根据题设直接算就好了,和数学中的概率算法一样

虞定淑1482质粒的提取原理 -
俞宋苏15067192952 ______ 质粒提取是指去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒. 目录 一、质粒提取原理 质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA,是进行DNA重组的常用载体.作为一个具有自身复制起点的复制单位...

虞定淑1482质粒提取的步骤 -
俞宋苏15067192952 ______ 实验一 ApaLI (178) P(BLA) ALPHA 质粒DNA的提取、 质粒DNA的提取、酶切 DNA的提取 及琼脂糖凝胶电泳 ApaLI (2367) EcoRI (397) AvaI (413)XmaI (413) SmaI (415) APr pUC19 BamHI (418) PstI (440)HindIII (448) P(LAC) ORI 2686 bp ApaLI ...