跑pcr所用dna浓度

杜超呢2018真菌dna做pcr条带总是很浅该怎么办? -
谭壮储18029018979 ______ 您应考虑以下几个方面: 首先是样品DNA质量,你应测下样品DNA的OD值,在1.8-2.0为宜,纯度或pH不对也会使PCR效果不佳.然后测下浓度,我们这用50-300ng/ul,PCR上样1-2微升,DNA浓度过高反而会抑制PCR反应.另外,最好跑个电...

杜超呢2018土壤细菌总DNA pcr模板量一般多少??? -
谭壮储18029018979 ______ 2ng左右,还高或过低pcr效果都不好,特别是模板量过高pcr是很难成功的,楼主可以测一下模板浓度,一般是25ul的反应体系中含有2ng左右的DNA效果比较好.

杜超呢2018PCR复制n次,至少需要加入多少引物? -
谭壮储18029018979 ______ 10uM浓度的引物,加个1ul足矣.在PCR反应中,经过n次循环,理论上DNA链的数目扩增了2的n次方.PCR的一个循环,一个DNA模板被复制为2个DNA片段. PCR循环次数通常就是30左右.循环数太多了,虽然在一定程度上能够提高产物量...

杜超呢2018如何消除PCR的拖尾 -
谭壮储18029018979 ______ 消除PCR拖尾的方法: 1、纯化模板 2、更换Buffer 3、适当提高退火温度 4、适量用酶 5、适当降低dNTP和镁离子的浓度 6、减少循环次数 PCR拖尾产生的原因: 1、模板不纯 2、Buffer不合适 3、退火温度偏低 4、酶量过多 5、dNTP、Mg 2*浓...

杜超呢2018请问PCR中的单位换算?1*PCR buffer、150μmol/L dNTP、1.0μmol/L引物、2.5 mmol/L Mg2+和2.0 U TaqDNA聚合酶,最佳模板DNA浓度为20~80 ng上面的... -
谭壮储18029018979 ______[答案] 以25ul的pcr体系为例,一般用浓度是25μmol/L的dNTP 2ul, 10μmol/L的引物1ul,2.5 mmol/L Mg2+ 2ul,模版一般1ul,2000u 的酶0.5ul.buffer一般选用10x,就是稀释10倍使用,每25ul体系加10xbuffer 2.5ul.u是酶活力单位.ng...

杜超呢2018PCR时人模板DNA的量加到5μg会不会有点多? 用的是TaKaRa Taq,50ul的反应体系 -
谭壮储18029018979 ______ 5μg的确有点多,看来你的DNA原液的浓度很高,一般PCR需要的模板量是有一定范围的,也是根据你要做的分子实验所需的PCR情况而不同的,模板量太高也许会有拖带或变性不完全现象,50ul你可以试着DNA终模板量为1μg或做几个不同模板量的梯度PCR,看看哪种效果最好,得以优化DNA模板量!

杜超呢2018pcr产物跑的电泳,为什么DNA都有拖尾 -
谭壮储18029018979 ______ PCR产物电泳拖尾,可能有如下原因:a.模板不纯.b.退火温度偏低.c.酶量过多,dNTP、Mg2+浓度偏高.d.循环次数过多. 解决办法:a.纯化模板.b.适当提高退火温度.c.降低酶量,适当降低dNTP和镁离子的浓度.d.减少循环次数

杜超呢2018实时荧光定量PCR可以用来精确测定DNA浓度吗? -
谭壮储18029018979 ______ 不是用来测浓度的,可以用来做基因的拷贝数.测浓度最经典的还是紫外分光光度计,当然会有偏差,不过总体来说还是可以的.也可以用酶标仪.

杜超呢2018如何确定样本rna浓度 -
谭壮储18029018979 ______[答案] 利用实时定量pcr技术,他可以检测pcr过程中dna的浓度: 原理是:当在引物作用下dna开始复制时 就会有荧光,然后电脑就会检测到,故复制一次,荧光强度就会增加一次,进而检测到dna的浓度,