qpcr对cdna浓度要求

杨航赖823荧光PCR的cDNA的量不同会影响结果吗 -
边知榕17372763002 ______ 相同样品相同基因cDNA的量不同,得到的Cq值就不同.基因的表达量少,Cq值就会偏大.如果这个基因的表达量很小且加入的cDNA量又不足的话就可能由于反应循环数过多导致反应体系中的酶活性下降,从而使得结果不稳定和可重复性差.所以想要得到一个可信的结果就需要使得得到的Cq值在一定的范围之内,不能太大也不能太小.

杨航赖823做荧光定量PCR前要做总RNA定量吗 -
边知榕17372763002 ______ 一般提取组织后测RNA的浓度,然后反转录的时候保证reaction mixture里面RNA的量是一样的.然后你反转录成了cDNA.这个时候不必要测浓度.因为你的反转录体系都是一样的,理论上讲(建议用multipipetide)你生成的cDNA也是一样的 RT-PCR有两种解释,一是指Real Time-PCR,即实时PCR;另一种是指Reverse Transcription-PCR,即反转录PCR.要判断文献中所说的RT-PCR是指实时PCR还是指反转录PCR,可以看反应体系中的模板,如果是DNA或cDNA,那就是指实时PCR;

杨航赖823pcr的实验步骤是什么样子的?pcr实验步骤
边知榕17372763002 ______ BIOGHC Elitefast SYBR Mix包含dNTP Mix、Mg2 、SYBR Green I;BIOGHC Elitefast ... 当反应结果不理想时,可以在0.1-1.0μM范围内调整引物浓度.qPCR反应灵敏性高,...

杨航赖823可不可以将不同浓度梯度的cDNA在同一板做定量PCR对基线和CT值得设置有影响吗? -
边知榕17372763002 ______[答案] 没有影响,标准曲线就是这样做出来的.梯度稀释的模板有不同的Ct值,然后就可以根据这个做标准曲线了.

杨航赖823qrt - pcr加cDNA的量,怎么加 -
边知榕17372763002 ______ 因为你所要检测的目的片段丰度不同,所以需要先做个预实验. 怎么做呢? 你先把cdna进行梯度稀释,然后进行pcr,如果你的primer所扩增的ct值在15-25之间,那么就是很不错的稀释梯度啦~ 以后实验久按照这个浓度加就好了

杨航赖823【急】【高分】在做Real - Time PCR之前,cDNA的浓度要调平吗?cDNA浓度怎么算啊? -
边知榕17372763002 ______ 看你实验要求,一般实验设计中没必要这么做 现在做绝对定量的很少,如果相对定量,只要找好对照基因即可. 你可能想检查自己的某个基因A表达是否发生变化了,提取了两个样品的cDNA,这种情况下,无需将两个样品的cDNA调整到相同浓度.而是找一个在两个样品中表达基本认为不变的持家基因B,然后对两个样品中的A和B同时都进行实验.通过检测不同样品中A与B的比值,就可以知道A基因表达是否发生变化了.

杨航赖823实时定量pcr - ------做实时定量PCR和rtPCR能用一样的引物吗? -
边知榕17372763002 ______ 不一样啊,通常情况下realtime PCR的引物长度会比较短一点 如果你的RT-PCR引物在300以内,应该做realtime也没问题,反正之前有用过的BIODAI就是这样的.RT-PCR逆转录部分加的是随机或者oligo引物啊,并非扩出目的基因啊,得到的cDNA可以做QPCR或者普通PCR,这个时候引物是一样的,只是浓度不同.

杨航赖823PCR反应的引物有何种要求? -
边知榕17372763002 ______ PCR引物设计的11条要求 1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计. DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的.在NCBI上搜索不同物种的同一基因,通过序列分析软件(比如DNAman)比对(Alignment),各基因相同的序列就是...

杨航赖823如何用RT - qPCR检测RNA浓度? -
边知榕17372763002 ______ 提总RNA 然后反转录成cDNA 然后做rt-pcr就可以啦

杨航赖823如何判定荧光定量结果的真实性 -
边知榕17372763002 ______ 如何判定荧光定量结果的真实性 荧光定量PCR(Real-time PCR)是目前基因表达定量分析的重要检测手段,已经为越来越多的研究者所采用.“好的开始是成功的一半”,Perrez-Novo等(Perrez- Novoet al., 2005)曾报道获得高质量RNA对后续...