酶切体系加多少酶

经寒义3209酶切体系如何建立?
冀萱狄15663496769 ______ 切质粒的话一般20ul体系就可以 质粒3-4ug, 酶1ul 然后就是buffer bsa h2o 如果质粒浓度比较小就用50ul体系

经寒义3209双酶切总是切不开.有没有人用过NEB的NotI这个酶 -
冀萱狄15663496769 ______ 双酶切怎么老是切不完全需要看具体的体系,质粒的质量,具体的酶 比如 50ul的体系: 酶切片段 43微升 Buffer 5微升 Sal I 1微升 EcoR I 1微升 因为将来要做凝胶回收,体系一定要大,而且不用加水,提出的质粒溶液就直接用于酶切,如果再加水,那样浓度会更低,产量不高. 建议100ul体系加2ul酶,因为1ul酶切不完全.

经寒义3209一个单位的的酶活能切多少的DNA -
冀萱狄15663496769 ______[答案] ①限制性内切酶(1 U)通常定义:在指明pH与37℃,在0.05mL反应混合物中,1小时消化1μg的λDNA的酶量为1单位.② 在实际使用中,对质粒DNA 酶切反应而言,限制性内切酶用量可按标准体系1μg DNA 加1 单位酶,消化1-2 小时...

经寒义3209对了我想问你一下,你之前说的在送去测序之前进行酶切检测,我想知道你的酶切体系是多少 -
冀萱狄15663496769 ______ 我一般检测的酶切体系,10ul,质粒视电泳条带亮弱,一般5ul 单酶切就1ul,双酶切,酶各0.5ul, 若是割胶回收用来连接,我因为之前总是连接转化不长菌斑,所以我都是20ul,4管,最后并一管,割胶回收. 检测10ul足够了,因为如果切了不对,换酶或者扔了,都不心疼....,点样5ul电泳就够了,当然你如果怕条带不亮,也可以全点了

经寒义3209酶切反应注意事项 -
冀萱狄15663496769 ______ 甘油浓度不要太高,注意星号活性.

经寒义3209酶切时质粒的量是不是1ug,是可用于所有的体系么? -
冀萱狄15663496769 ______ 这个没有特别的规定吧,你是酶切鉴定,还是酶切质粒得到目的片段?对于10ul的酶切体系我们一般加入2ul质粒,大概是400ng左右.

经寒义3209Xho1和Nde1 50μl双酶切反应体系的配制?用Xho1和Nde1对载体质粒和目的片段分别进行双酶切,50μl的酶切体系应该怎样配制?我不知道每种试剂加多少好... -
冀萱狄15663496769 ______[答案] 由这两种酶组成的双酶切体系并不需要添加BSA,请你仔细核对,两种酶的最适反应温度均为37摄氏度所以双酶切温度应为37摄氏度.如果选用TaKaRa的限制性内切酶那么Buffer应使用H Buffer,对于50 μl的酶切体系而言应分别加...

经寒义3209酶切反应体系里,总得要求是20ul,现在已知底物DNA为,200ng/ul,有10ul,求需要多 -
冀萱狄15663496769 ______ 首先是10*的缓冲液,配制20ul,则需要2ul缓冲液 其次是酶,一般用0.5-1ul,看具体的实验情况吧.DNA的话,你做的是酶切鉴定还是酶切回收还是什么,这个会决定你所加的底物的量.最后加水补齐20ul.

经寒义3209限制性内切酶,连接酶等这些酶,他们是怎么来的,是DNA么?还是什么? -
冀萱狄15663496769 ______ 首先,不是DNA. 这些酶的本质是蛋白质. 这些酶开始时候都是 从细菌细胞中分离纯化而来,后来多通过基因工程得来.即把这些酶的基因(DNA片段)转化进入某种细菌(一般是大肠杆菌),再通过细菌大量合成,最后再分离纯化得到.

经寒义3209宝生物公司的内切酶双酶切时所用到的缓冲液用什么来稀释 -
冀萱狄15663496769 ______ 宝生物的缓冲液都是10*的,你用的时候如果酶切10ul体系,就加1ul缓冲液就行,然后再加上你要切的质粒或DNA片段,加上酶,最后用水补足10ul, 就行了