酶切质粒浓度

别馨洋3425我刚把质粒提出来时,忘记了测浓度!如果是酶切过夜后,在进行测浓度,还准么? -
毛峰刮19476601591 ______ 你测浓度的目的也是想切完成一些,如果你都确定切干净了,测的浓度就是酶切的后的质粒浓度,有什么关系,Ok展开全部

别馨洋3425如果片段连入表达载体,酶切鉴定目的带特别淡时,表达蛋白时会受影响吗? -
毛峰刮19476601591 ______ 首先肯定酶切鉴定目的条带很淡不会影响后续的蛋白表达.表达载体的构建是否成功,酶切鉴定只是第一步鉴定结果,目的条带的深浅有很多影响因素,例如酶切时质粒浓度,插入片段的长短,是否酶切完全等.最重要的是,要将获得的构建质粒送过去测序,如果测序结果正确,这就表明表达质粒构建成功.只要表达质粒构建成功就可以用于后续的蛋白表达.只要质粒测序正确,目的条带酶切时的条带深浅是与蛋白表达的是否成功没有任何联系.

别馨洋3425为什么要对重组质粒DNA进行双酶切 -
毛峰刮19476601591 ______ 双酶切就是为了验证是否有目的基因,如果双酶切条带正确,而且PCR也没有问题,就可以确定质粒构建成功. 质粒具有稳定可靠和操作简便的优点.如果要克隆较小的DNA片段(<10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好.在质粒...

别馨洋3425酶切原来的质粒作为新的载体会污染吗 -
毛峰刮19476601591 ______ 这个由几个方面的因素决定:1.保存的酶切质粒是否经过纯化,如果经过纯化,比较容易保存2.此酶切质粒是否经过反复冻融.如果频繁多次冻融,DNA会比较容易降解,所以建议保存的时候能够分装冻存,每次取出一部分来,不反复冻融,保存会比较好3.酶切质粒的浓度,通常浓度越高,质粒也会越稳定.以前我们实验室做的pET载体,保存在-20C半年多都能用,就是做得很浓4.为了保险起见,可以在连接前取一小部分载体去电泳看一下,有没有降解,如果条带清晰,亮度也理想的话,没有问题,可以使用的.

别馨洋342520ul双酶切体系和10ul双酶切体系的区别 -
毛峰刮19476601591 ______ 20ul双酶切体系和10ul双酶切体系的区别:DNA的量是3.5微升 1、产物浓度不同 20ul双酶切体系比10ul双酶切体系产物的浓度高. 2、DNA反应量不同 20ul双酶切体系所含DNA要比10ul双酶切体系含有的DNA多,进行双酶切时所要切的DNA量也...

别馨洋3425质粒DNA酶切试剂加入的顺序为什么是水缓冲液DNA酶?
毛峰刮19476601591 ______ 一般购买的时候都会配有缓冲液和推荐用量的.质粒的浓度不要过高就行.如果没有完全切开,可以延长酶切的时间.

别馨洋3425再次请教生物问题 -
毛峰刮19476601591 ______ 一般,防止酶切产物自连最常用的就是双酶切,因为产生的粘性末端不同,所以很难发生自连.但实际上最后筛选的时候经常也会出现空载体的情况,这个很大一部分原因是有部分载体没有切动,并不是载体自连的问题.这些没有切动的载体转化率是非常高的,这是转化过程中假阳性的最大来源.载体自连最容易发生的情况有两种,一种是单酶切,一种是平末端连接.这两种情况下,通常为了防止载体自连会对酶切后的载体使用碱性磷酸酶处理,将DNA 5'端的-P基团置换成-OH,这样会一定程度的防止载体自连.

别馨洋3425双酶切时,是直接用pcr产物就可以,还是需要 -
毛峰刮19476601591 ______ 1、回收PCR产物: 在进行PCR扩增时候,给引物两端设计好酶切位点,一般说来,限制酶的 选择非常重要,尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶,如BamHI,HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER,以及各酶在公用...

别馨洋3425刚活化后 提取的质粒(小量试剂盒提取法) 电泳图为什么会出现2、3条带?这是中间载体的质粒,马上要酶切 之后链接,之前是因为没有链接成功,所以怀... -
毛峰刮19476601591 ______[答案] 这是很正常的,质粒提取过程中或多或少会对质粒本身造成一定的损伤,根据损伤的不同,质粒通常会出现三种不同的构型,分别是双链环状,线性分子(机械损伤造成质粒链完全断开)和单链开环(双链中只有一条链断开,另外一条是闭合的)....

别馨洋3425质粒提出来后,电泳只有一条比较粗的带,为何?酶切后全是拖行带,求解 -
毛峰刮19476601591 ______ 质粒抽提过程中由于物理机械作用,跑胶后应该有三种构型,跑的最快的是超螺旋构象;其次是线性,相当于你用限制性内切酶单酶切把质粒切成一条线性的带;最慢的是开环构型,就是双链中的每条单链上在不同的位置有缺口,但缺口不同时...