酶切质粒的目的

厉义贾609单酶切和双酶切的定义分别是什么?它们有什么不同?做实验的时候要把400bp目的片断连到pcDNA3.1(+)质粒中去:单酶切质粒后用T4 DNA连接酶连接... -
蒲震苗13554297048 ______[答案] 单酶切就是只用一个限制性内切酶去切你的质粒,环状的质粒就成为线状的了,但质粒的大小不变双酶切用两个限制性内切酶,质粒上就产生了两个缺口,环状质粒就变成两段线状DNA了.回收你需要的那一段,因为它的两端和你的目...

厉义贾609在基因工程中,用2种酶切目的基因是防治自身环化,那么就会产生2种黏性末端,问题是质粒...在基因工程中,用2种酶切目的基因是防治自身环化,那么就... -
蒲震苗13554297048 ______[答案] 将目的基因和质粒都用两种不同的酶,形成可以互补“嵌合”的切口,这时再施加DNA连接酶,就可以自己组合了. 就像一个平末端,一个粘性末端那样,就不怕自身环化. 质粒上应该是切两次的,但只会产生一个切口,你可以自己画个圆环试试,一...

厉义贾609质粒DNA重组的步骤是怎样的 -
蒲震苗13554297048 ______[答案] 1.作为载体质粒的分离 2.含有目的基因DNA序列的酶切 3.目的基因插入质粒 4.重组质粒经转化导入受体细胞 5.克隆韩目的基因的细胞

厉义贾609提完质粒后,可以进行PCR检测也可以进行酶切检测?在什么时候进行的?个有什么作用? -
蒲震苗13554297048 ______[答案] 一般先跑琼脂糖电泳检测是否提出了高质量的质粒,然后通过PCR检测所提的质粒是否是目的质粒. PCR检测指用特异引物对目的DNA进行PCR,根据产物判断 DNA是否含有目标序列.酶切检测则是通过对目的DNA上已知酶切位点的酶切,根据产物...

厉义贾609请大侠赐教:什么时候用单酶切,什么时候用双酶切?我看文献时是目的基因先与一个质粒载体连接(用一种酶消化后连接),然后再用两种酶切下这段目的... -
蒲震苗13554297048 ______[答案] 构建就是个过程嘛 最后能搞出那个质粒 不管你用什么方法都无所谓啦 管他单切双切的

厉义贾609提完质粒后需要做什么工作?是跑琼脂糖电泳还是做PCR检测?PCR检测和酶切检测各指的什么? -
蒲震苗13554297048 ______[答案] 一般先跑琼脂糖电泳检测是否提出了高质量的质粒,然后通过PCR检测所提的质粒是否是目的质粒. PCR检测指用特异引物对目的DNA进行PCR,根据产物判断 DNA是否含有目标序列.酶切检测则是通过对目的DNA上已知酶切位点的酶切,根据产物...

厉义贾609如图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图,据图回答:(1)图中通过过程①、②形成重组质粒,需要限制酶切取目的基因、切... -
蒲震苗13554297048 ______[答案] (1)在DNA连接酶的作用下,上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的,所以能够连接起来. (2)基因工程的核心是基因表达载体的构建.基因表达载体含有绿色荧光蛋白基因(目的基因)、启动子、终止子和标记基因. (3)过程③将重组...

厉义贾609...个DNA片段,用AluⅠ处理图乙所示的外源DNA会增加______个游离的磷酸基团.(2)为了避免目的基因和质粒在酶切后产生的片段发生自身环化或任意... -
蒲震苗13554297048 ______[答案] (1)质粒上含有两个SmaⅠ限制酶的切割位点,所以用SmaⅠ限制酶处理图甲所示的质粒会得到2个DNA片段;图乙所示的外源DNA含有一个AluⅠ限制酶的切割位点,所以用AluⅠ处理外源DNA会形成两个黏性末端,增加2个游离的磷酸基团. (2)外...

厉义贾609.质粒DNA的末端是由SmaI:5' - CCC↓GGG - 3'酶切产生的平末端,而目的基因的末端是.质粒DNA的末端是由SmaI:5' - CCC↓GGG - 3'酶切产生的平末端,而目的基... -
蒲震苗13554297048 ______[答案] 可以采用以下方法: 1、磷酸酶磷酸化质粒和目的片段末端,再用T4 DNA连接酶连接即可;(方便操作但目的片段连接没有方向) 2、质粒末端+A/T,目的片段末端+T/A,磷酸化,再用T4 DNA连接酶连接即可;(可控制目的片段连接方向)

厉义贾609质粒与目的基因连接得到几种重组质粒 -
蒲震苗13554297048 ______[答案] 如果是双酶切,而且两个酶切位点不能形成自连,那么插入目的基因也只能获得一种重组质粒. 如果是单酶切,或者双酶切的两个酶切位点是同尾酶,那么插入目的基因能获得两种重组质粒.