24孔板转染质粒

赖勤思2694如何提高转染效率(转染,质粒,质粒转染,脂质体 -
仰宁怎17642803967 ______ 如何提高转染效率(转染,质粒,质粒转染,脂质体 转入质粒的原理:质粒上连的片段转录后能够自身互补形成双链(shRNA),在细胞内被细胞自己剪切成siRNA. 两种转染方法在功能上是一致的.但是siRNA转染以后发挥作用的时间较短,用于短期抑制试验(一般维持一周以内).而因为质粒存在于细胞内比较稳定(载体上含有抗生素标记,可以筛选),能够持续表达产生shRNA,然后不断产生新的siRNA,因此维持作用的时间长(可以超过两周). 另外用质粒还可以同时转入报告基因作为对照,确定质粒确实已经转染进去了.

赖勤思2694OPTI - MEM进行贴壁细胞培养的实验方法是什么? -
仰宁怎17642803967 ______ 无血清培养基可以提供细胞贴壁需要的一些基质,本文总结了利用无血清培养基OPTI-MEM进行贴壁细胞的脂质体转染试验材料,步骤、个人经验以及问题分析. 贴壁细胞的脂质体转染 一、实验材料 1、宿主细胞CHO(贴壁细胞) 2、脂质体...

赖勤思2694请教,关于lipo2000转染效率低下的原因探讨 -
仰宁怎17642803967 ______ 脂质体的转染毒性是最大的,很明显,那么多的细胞死亡是由于转染的细胞毒性导致的.对于这一点我有两个建议,一个是减少DNA的用量,我一般做转染,对于任何细胞,只要是12孔板,一般都是用1ugDNA,这个量绝对够了.,因为质粒转...

赖勤思2694质粒转染的转染试剂可不可以用lip2000呢 -
仰宁怎17642803967 ______ 可以的,很常用的.lip2000、effectene都是常用的.这里有个详细转染的方法,见链接.希望能帮到你!

赖勤思2694哪位同学可以介绍下Luciferase原理 -
仰宁怎17642803967 ______ 荧光素酶报告基因 Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统.中文名 荧光素酶报告基因 外文名 Luciferase 底 物 荧光素(luciferin) 生物荧光 bioluminescence 转录因...

赖勤思2694转染时质粒怎么定量 -
仰宁怎17642803967 ______[答案] 质粒是先用分光光度计定浓度的,然后根据你转染的方法,转染细胞的多少确定要转多少质粒,然后就可以算加入的体积了.

赖勤思2694质粒转染进入细胞怎样保证无菌? 麻烦高手指教啊? -
仰宁怎17642803967 ______ 不明白啊 = =!

赖勤思2694稳定转染细胞时,质粒总是丢失,大家有什么解决方案吗 -
仰宁怎17642803967 ______ 稳定转染的细胞株,就是转染后质粒可以稳定整合到基因组上不会因细胞分裂而丢失.区别于质粒瞬时转染不能长时间保留质粒在细胞里.

赖勤思2694为什么我用电穿孔法转化质粒,几次都转不进去 -
仰宁怎17642803967 ______ ,很可能是你细胞没有做好.你可以重新做一下细胞.xj0311(站内联系TA)大肠杆菌转化不是很费劲,质粒不算大,应该可以的,查查你的感受态细胞,换换感受态,应该问题不大xj0311(站内联系TA)大肠杆菌转化不是很费劲,质粒不算大,应该可以的,查查你的感受态细胞,换换感受态,应该问题不大,尝试一下化转summer_101(站内联系TA)多加DNA,去salt尽量干净.

赖勤思2694质粒的荧光会干扰双荧光素酶的测定么? -
仰宁怎17642803967 ______ 启动子的预测转录因子的预测报告基因质粒的构建实验方法及结果分析 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点.设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段,将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒(pGL3-basic)中.筛选阳性克隆,测序.扩增克隆并提纯质粒备用.扩增转录因子质粒,提纯备用.同时准备相应的空载质粒对照,提纯备用.培养293(或其它目的细胞),并接种于24孔板中,生长10-24小时(80%汇合度).将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞.提取蛋白并用于荧光素酶检测.加入底物,测定荧光素酶的活性.计算相对荧光强度,并与空载对照比较.