6孔板提蛋白加多少裂解液

蒲冯爽2263请问细胞裂解液如何配制,谢谢了先! -
常郑王17191374865 ______ 博凌科为生物科技-为你解答:一、试剂准备1、新鲜配制冷的 RIPA 裂解缓冲液:150 mM NaCL1% NP-40 (去垢剂) 0.1% SDS (去垢剂)2ug/ml Aprotinin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)2ug/ml Leupeptin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入...

蒲冯爽2263提总蛋白用的裂解液,同时不加NP - 40和TritonX - 100,可以么? -
常郑王17191374865 ______ 不可以,Triton X-100的性质和NP-40很相似,没有必要加了1%NP-40还加TrionX-100,这些非离子型表面活性剂的作用到底不如SDS这些离子型的

蒲冯爽2263如何提取小鼠脂肪组织的蛋白和做western blot -
常郑王17191374865 ______ 你好,提取总蛋白需要蛋白酶抑制剂和裂解液.一般是1:1进行配制.用的裂解液我们是RIPA. 将组织用液氮研磨碎了,然后按量加入裂解液,细胞量在10七次方左右是100微升.冰浴裂解20分钟(间断摇动).然后4摄氏度离心12000rpm,15分钟.

蒲冯爽2263如何提取细胞膜(植物细胞)上的蛋白质 -
常郑王17191374865 ______ 一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上. 2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时). 3、用离心机离心8000rpm40min...

蒲冯爽2263如何提细胞的组蛋白做western blot -
常郑王17191374865 ______ 你的意思就是提取核蛋白,提取核蛋白和提取全蛋白用的裂解液是不一样的.一般情况下我们都是买试剂盒,里面包含有细胞裂解液和核裂解液,按照说明书实用就行了. 1 20mmol/L的Hepe(PH 7.9) 2 420mmol/L NaCl 3 1.5mmol/L MgCl...

蒲冯爽2263细胞系裂解液和提取,有了ripa裂解液怎么提取蛋白 -
常郑王17191374865 ______ 加到细胞培养皿里面 摇15分钟 然后刮下来吸出来 是做western的话加Loading buffer 再95°煮10分钟就OK啦 ………………………… ……………………………… 更多具体材料请参考: 细胞系裂解液和提取 http://product.bio1000.com/100129/

蒲冯爽2263请教如何从培养细胞提取mRNA -
常郑王17191374865 ______ 离心收集细胞. 可用0.5MLltrizol,振荡--- 100微升氯仿 ,剧烈振荡,分层静置,12000RPM台式离心机 4度 10分钟--------取80%上清 ,加500微升异丙醇,沉淀总RNA,12000RPM,4度,5分钟 ----弃上清,加1ML75%冰乙醇洗涤,12000RPM,4度,5分钟------倒去吸边,空气中干燥30分钟-------加20-50微升DEPC处理的消毒三蒸水,溶解,低温保存备用.如果不保留样本,可不用DEPC处理的三蒸水,用消毒三蒸水即可则进入逆转录. 另外液体的体积可按上述比例.

蒲冯爽2263如何配制 lysis buffer 用来提取组织蛋白的 -
常郑王17191374865 ______ 可以采用一步法动物组织活性蛋白提取试剂盒 BSP006

蒲冯爽2263培养细胞如何提取mRNA,如何逆转录?培养细胞提取mRNA的原理是什么?如何用所提取的mRNA进行逆转录? -
常郑王17191374865 ______[答案] 1 细胞总RNA的提取 1)、6孔板细胞(CNE-2)汇合度为90-100%时,取出无菌室,去其上清,用PBS洗两次后,每孔加TRIZOL试剂(Gibco公司) 1 ml,摇匀,无菌罩内消化3-5分钟(观察:液体变粘稠,细胞脱壁). 2)、将各孔内消化好的细胞裂解液...

蒲冯爽2263基因组DNA提取中细胞裂解液怎么配制 -
常郑王17191374865 ______ 裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解.化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法,通常会很少使DNA 断裂.这两种方法(包括SDS 和溶菌酶处理等)提取纯化DNA中常用的方法.机械裂解可以更均一的裂解细胞,同化学裂解相比,机械...