mix酶和高保真酶

薛芸奖849PCR SuperMix中的Taq酶和Pfu酶有什么区别?它们分别有什么作用? -
庞紫官13990578558 ______[答案] 两者都是DNA聚合酶,区别在于,pfu是高保真DNA聚合酶,即DNA合成时碱基错配率比taq酶低,一般情况,不太长的片段或序列准确度要求不是很严格的用taq酶,对于长片段或序列准确度要求高的用pfu酶.在实际使用中,往往鉴于pfu酶...

薛芸奖849重叠延伸PCR的酶一定要用高保真的Taq酶吗?普通的Taq酶可以吗 -
庞紫官13990578558 ______ 重叠延伸PCR技术由于采用具有互补末端的引物,使PCR产物形成了重叠链,从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸,将不同来源的扩增片段重叠拼接起来. 重叠延伸PCR技术成功的关键是重叠互补引物的设计: 引物F及R为基因两端特异引物,其中Fm及Rm为中间引物.其中引物Fm及Rm中间共享一段序列. 分别用引物F和Rm及Fm和R进行配对进行PCR.注意该步一定不要用Taq酶,因为Taq酶容易在PCR产物末端加A,从而可能会使产物移码突变. 希望能帮到你!

薛芸奖849罗氏高保真的酶的PCR产物可以和T载体连接吗 -
庞紫官13990578558 ______ 不可以,高保真酶产物一般都是平末端.纯化产物加taq酶,buffer和dNTP,72℃反应10~30分钟即可加尾,产物就可以直接与T载体连接了.

薛芸奖849用简并引物扩增基因 需要用高保真酶吗 -
庞紫官13990578558 ______ 用简并引物扩增基因 需要用高保真酶 一般对于已知序列的PCR当然不要从保守序列来设计引物,只要从开放可读框前后开始设计就行了.需要从保守序列设计引物的情况一般是两种,一是某个物种里面某个特定基因序列从未被分离过,但其进化...

薛芸奖849在PCR扩增实验中应注意什么? -
庞紫官13990578558 ______ 1. 引物的质量是保证PCR特异性的关键,引物过长或过短均会使特异性降低,以18~30bp为宜;引物中C+G含量宜在50%左右;引物内部和引物之间不应含有互补序列;引物的碱基顺序与非扩增区域的同源性应小于70%;引物的3'末端与模板...

薛芸奖849构建CDNA文库所需的酶有几种?是那些?谢谢(高中生)说的通俗点~ -
庞紫官13990578558 ______ 反转录酶:以mRNA为模板反转录合成DNA. 限制性内切酶:酶切目的基因和载体,使其产生相同的粘性末端. DNA连接酶:连接目的基因和载体.

薛芸奖849做PCR时Master Mix是什么意思啊 -
庞紫官13990578558 ______ 做PCR时Master Mix是指反应混合物,即PCR试验时使用的预混物. Master Mix 的配制:一般PCR 的 MasterMix 都是两倍的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以. MasterMix 的配置过程中,需要注意: 1、MasterMix 不要反复冻融,如果经常...

薛芸奖849菌落pcr用的rtaq是什么 -
庞紫官13990578558 ______[答案] Taq酶就是PCR中要用的DNA聚合酶,rTaq酶就是指常用的重组表达Taq酶,价格便宜,但保真度低. 若是做菌落PCR鉴定,rTaq足够了,若是做后续的分子克隆,最好用高保真酶,以保没突变. 个人见解,仅供参考,祝愉快!