pcr检测n个循环拷贝数

印包帘4083小分子RNA的检测方法 -
郝钧烁19546383953 ______ 实时荧光定量PCR技术是1996年由美国Applied biosystems公司推出在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术.该技术在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,使每一个循环变得“可见”,...

印包帘4083PCR技术原理是什么? -
郝钧烁19546383953 ______ 原发布者:yqjklhq 一.简述PCR基本原理?PCR技术的基本原理 类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物.PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右...

印包帘4083怎样检测pcr板封膜后孔与孔之间没有相互污染 -
郝钧烁19546383953 ______ 目测是最基本的,首先要保证孔与孔之间没有明显的液滴,或是液滴干掉留下的印记.如果在封口膜和板之间已经能看到液体(不在PCR管里面的),就说明已经有样品溢出,可能已经污染了.其他的方法就只有通过PCR来进行验证了,看看不同的孔之间有没有相互干扰的情况,因为通常情况下,如果溢出不太严重,通常是周围几个孔发生污染,而不会是全部孔都污染的.

印包帘4083real time PCR能测定基因组内某一基因的拷贝数吗 -
郝钧烁19546383953 ______ 这个先要把基因组提取出来,然后把基因组做模板,对那个基因进行RT-PCR,如果所研究的某一基因的所有拷贝数都包含在基因组内的话,那么就可以确定原始的拷贝数,当然需要制作一个标准曲线的,(可以把那段基因当做定量的工具,先要准确定量好,浓度大一点的,就是说先定量一个ng级以上的标准模板,可以用紫外分光光度计或是nanodrop等仪器能够检测出的,然后梯度稀释,这样先制作成一个标准的曲线)这样可以根据RT-PCR的扩增Ct值代入到标准曲线里去求出拷贝数,当然模板要全部包含在基因组内.不知道我说的对不对,也就是你所说的实际上就是检测模板的浓度.

印包帘4083PCR污染的原因是什么 -
郝钧烁19546383953 ______ 污染原因: 1)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤...

印包帘4083在real - time PCR中如何检测DNA污染 -
郝钧烁19546383953 ______ 既然把DNA叫做污染,那应该是对RNA反转录后进行Real-time了. 你用未进行反转录的RNA作为模板,跑一次检测Real-time.如果没有DNA污染,这次RT是不会得到扩增结果的,因为RNA不能作为普通Taq酶的模板;一旦RNA样品里面有DNA污染,那检测RT出现扩增产物的可能性非常高. 只要RNA作为模板的Real-time PCR得到了扩增结果,那就是存在DNA污染. PCR产物的融解曲线必须做,而且你也必须得知道这对引物二聚体的融解峰,防止引物二聚体误导结果.

印包帘4083麻烦大家帮帮我,PCR里面逆转录反应液中这些都代表什么都是什么意思啊 -
郝钧烁19546383953 ______ 5*prime script buffer 这个代表你给扩增的DNA一个反应环境,Prime script RT Enzyme mix 这个是原料混合液,就是组成DNA所需的A T C G,RNase Free H2O 这个是RBA酶不含水.Total RNA这个是你要扩增的目的基因.

印包帘4083数字PCR检测方法如何选择? -
郝钧烁19546383953 ______ 数字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一种核酸分子绝对定量技术.相较于qPCR,数字PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的绝对定量. 在定量PCR时,我们常常纠结一个问题,究竟是相对定量还是绝对定量呢?如今,你...

印包帘4083半定量pcr如何分析基因拷贝数 -
郝钧烁19546383953 ______ 电泳后拍照,用图像分析软件测定条带的亮度,然后与标准参照带的亮度进行比较,推算出待测带的拷贝数.

印包帘4083逆转录PCR的介绍 -
郝钧烁19546383953 ______ 逆转录PCR(reverse transcription PCR)或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增.