pcr溶解曲线出现双峰

虞青轻4395荧光定量PCR中扩增曲线能说明什么问题?
却购景18378293716 ______ 在荧光法定量PCR中溶解曲线直接表示了引物的特异性,如果是单一的峰,那么我们要看的是TM值在哪里,通常情况下都是80---90之间,如果太小那可能扩增出来的不是你想要的片段就是引物二聚体,如果两个峰那就说明出现了非特异性扩增

虞青轻4395RT - PCR融解曲线详解 -
却购景18378293716 ______[答案] 融解曲线是荧光定量PCR仪出现后为了考察染料法结果的特异性产生的.大家使用荧光定量PCR的目的(也是荧光定量PCR的宣称优点)有快速、准确及无污染,其中快速的前提之一是不用跑电泳就可以通过扩增曲线考察初始拷贝数的量;准确是因...

虞青轻4395q - pcr融解曲线主峰前面有个向下的小峰,怎么回事? -
却购景18378293716 ______ 有点波动可能是由于仪器精密度引起的,不必太在意

虞青轻4395qPCR融解曲线的峰高由什么决定?相同的引物有一模板峰高与其他不同, -
却购景18378293716 ______[答案] Tm值相同,而峰高低有差异是表达丰度不同,同样的扩增产物也会出现Tm值有微小差异,一般差异在1度以内都可以接受.融解曲线的纵坐标表示荧光信号对温度的一阶负导数.

虞青轻4395什么是PCR熔解曲线法 -
却购景18378293716 ______[答案] PCR熔解曲线分析法是做realtime-pcr时分析,用来确定不同的反应产物,包括非特异性产物的分析方法.原理是在扩增反应完成后,通过逐渐增加温度的同时监测每一步的荧光信号来产生溶解曲线,随着反应中双链DNA变性,荧光染料又回复到游离...

虞青轻4395实时定量PCR内参基因和待测基因峰不同说明什么? -
却购景18378293716 ______ 内参基因和待测基因本来就不一样. 扩增曲线和溶解曲线不是一个概念.扩增曲线是每扩增一个循环,测量一次荧光强度.这个由底物的浓度和扩增效率所决定.目的基因和内参的浓度肯定不同,而且引物的序列不同,扩增效率也可能不一样,所以两者的曲线肯定有可能不一样. SyberGreen PCR,溶解曲线是PCR完成以后,对产物逐步加温,测量荧光强度的变化,而不是荧光强度本身.DNA双链在温度达到TM附近时,发生大量的解离,荧光强度的变化最大,出现峰值.这个峰值的位置是由PCR产物的TM值所决定的,和PCR产物的序列,GC比例有关.所以内参基因和目的基因的峰值肯定是不一样的.

虞青轻4395为什么我用同一标本的cDNA和PCR产物做出来的溶解曲线高峰不在同一位置?
却购景18378293716 ______ PCR产物是两段引物之间的序列,只是原样本的一部分而已……

虞青轻4395请问实时定量PCR的绘制溶解曲线应该从多少度开始升温?我的实验结果里,溶解曲线在55度时候有个小峰,请问可能是什么原因造成的? -
却购景18378293716 ______[答案] 如果扩增产物只有目标序列的话就应该只有一个峰的.1.简单的说来,溶解曲线就是在采用荧光染料法进行实时定量PCR时采用的一种分析手段.当体系的温度逐渐升高的时候,体系中的PCR产物慢慢的由双链变成单链,这是一个逐渐...

虞青轻4395定量PCR试验,模板、引物都一样,只是mix分别用2家公司的,熔解曲线都是单峰,但峰值却相差2 - 3度,为什么 -
却购景18378293716 ______[答案] mix中镁离子含量、缓冲液组成等等都是可以影响到溶解曲线出峰值的.这个和Tm的影响方式差不多.

虞青轻4395为什么在real - time pcr实验结束之后要做一个melting curve -
却购景18378293716 ______ 溶解曲线是为了佐证你的数据的有效性.因为SYBR Green无论是特异性扩增还是非特异性扩增都会掺入到双链DNA中,如果有非特异性扩增或者引物二聚体等,都可以用溶解曲线看出来,以排除这种可能.