pcr溶解曲线有一个小峰

廉兴眨5258溶解曲线为什么出现双峰 -
水尤洁13265384669 ______ 溶解曲线的意思是:当温度高于扩增产物的TM值时,双链产物变单链,荧光值因为这样的变化而产生变化,根据这一原理,你推算你的体系是是否会在温度变化时产生荧光值的变化,比如你用的是TAQMAN探针,taqman探针产生荧光变化的原理是探针被外切酶活性的TAQ酶剪切断而产生的,那么在只有温度变化的情况下,是没有荧光值变化的,自然就没有溶解曲线了.但是假如你用的分子信标探针或者sybgreen燃料,情况就不同了.

廉兴眨5258荧光定量PCR熔解曲线 -
水尤洁13265384669 ______ 溶解曲线是在正常的PCR反应基础上加一个溶解曲线的反应条件,其中当温度由60℃升至95℃时,PCR仪每隔一定的温度检测一次信号.最后将收集的信号绘制出溶解曲线,然后将溶解曲线一次微分就会得到我们平时看到的峰性图.每一条线代表着某个孔里的反应体系里产物的单一情况,某一条线如果为单峰且在一定合理的温度范围内(一般为80~90℃)则认为正常,如果为双峰则可能有非特异性扩增.由此可以判断产物是否为目的基因且是否单一.内参有内参的线,目的基因有目的基因的线,同一条线不会出现两个基因的峰.你可以看一下溶解曲线的横、纵坐标.

廉兴眨5258SYBR green PCR溶解曲线有何意义 -
水尤洁13265384669 ______ 作用类似于电泳,但是相对于电泳更灵敏,更清晰一些. 通过溶解曲线可以了解目的产物TM值,是否出现杂峰.一般溶解曲线的结果+电泳的结果和在一起相对比较准确.当然最后片段也可以测序最终确定目的产物. 主要的是:根据溶解曲线...

廉兴眨5258我是荧光定量pcr初学者,现在想做定量试验,最近做了个标准曲线,可是点都不在线上,内和目的基因都是 -
水尤洁13265384669 ______ 条件是没有经过优化的,可能因为是不是最近反应体系,另外也有可能是因为模版质量不好的关系 先多看点资料

廉兴眨5258谁能具体解释一下荧光定量PCR中溶解曲线的意思以及作用? -
水尤洁13265384669 ______[答案] 用Syber Green方法做完PCR后,用来判断产物是否相对专一.反应结束后,逐渐加温.和Syber Green分子结合的PCR产物随温度升高逐渐变为单链,就不能在和Syber Green结合.一般每加温一度,读一次信号.当温度到达PCR产物的Tm时,产物解离...

廉兴眨5258为什么在real - time pcr实验结束之后要做一个melting curve -
水尤洁13265384669 ______ 只有用Syber green的才要做,使用probe-primer的是不要做的.原因如下:采用Syber green的real-time PCR有可能扩增非特异性产物,光看PCR产物的信号无法区别到底是特异性产物还是非特异性的.由于扩增的序列已知,可以计算该序列的...

廉兴眨5258荧光定量PCR引物设计
水尤洁13265384669 ______ 完全可以,PCR长度从50bp到数百都可以,不止局限于150-300个碱基对.楼上说的有道理,但是有一点要注意,最好计算一下扩增片段的Tm值,这样做溶解曲线的时候,光有一个峰还不够,而且得到的TM和你计算的Tm相吻合才行. 是否在翻译区没有影响.

廉兴眨5258做Realtime PCR时同样的复孔溶解曲线有的单峰特异,有的多峰Realtime PCR第一次做溶解曲线都是好的,后来同样的引物同样的条件和cDNA结果出来的... -
水尤洁13265384669 ______[答案] 可能是cDNA降解,也有可能你检测的片段表达量低,也有可能pcr mix有问题 建议多做几个复孔,选取其中的数据,或者重新设计引物

廉兴眨5258real time pcr的融合曲线出现两个峰
水尤洁13265384669 ______ 选两个峰之间 的温度增加观测点,第二个是高温杂峰,通过软件减去其吸光值得到单峰的起飞曲线

廉兴眨5258怎么理解荧光定量pcr的溶解曲线
水尤洁13265384669 ______ 这个一般是用SYBY Green作为荧光染料的时候需要做的工作! 因为SYBY Green染料是非特异的染料,只要有扩增,染料就可以镶嵌在双链中发出荧光.我们做溶解曲线是为了观察我们扩增发出荧光的片段是不是我们需要的产物.如果溶解曲线做出来只有单峰,且出锋位置是你的退火温度,那么这个是你的产物发出的荧光,实验结果有效.如果出现多锋或退火温度不对,那么这个实验结果是不可信的!你需要再次调整!