qpcr溶解曲线不好怎么办

空衫仁2182酿酒酵母rt - qpcr内参用哪个基因 -
方吴堵18229934698 ______ 最近我做了荧光定量PCR,每次做的时候溶解曲线效果就很差,不是单一的峰,说明是有非特异性的扩增,但是在普通PCR仪上做的PCR时,只显示了一条带,很清晰,是怎么回事啊?荧光定量的灵敏度太大了么?还有斑马鱼的内参基因怎么...

空衫仁2182q - pcr融解曲线主峰前面有个向下的小峰,怎么回事? -
方吴堵18229934698 ______ 有点波动可能是由于仪器精密度引起的,不必太在意

空衫仁2182荧光定量PCR 溶解曲线与什么有关 -
方吴堵18229934698 ______ 荧光定量PCR 溶解曲线是验证有无非特异性扩增的, 与引物的溶解温度有关

空衫仁2182我是荧光定量pcr初学者,现在想做定量试验,最近做了个标准曲线,可是点都不在线上,内和目的基因都是 -
方吴堵18229934698 ______ 条件是没有经过优化的,可能因为是不是最近反应体系,另外也有可能是因为模版质量不好的关系 先多看点资料

空衫仁2182如何调整实验条件优化qPCR的效率 -
方吴堵18229934698 ______ 1、尽量少写 多层的for嵌套,影响效率.2、用memcache或者其他缓存技术,将常用的 数据字典数据缓存到内存中,也可以缓存到文本文件中,节省数据库连接数量及数据库的资源.3、尽可能少的去连接数据库,减少连接数量.4、数据库查询,少用select * ,建议用 select 字段1、字段2...还有很多...

空衫仁2182qPCR融解曲线的峰高由什么决定?相同的引物有一模板峰高与其他不同, -
方吴堵18229934698 ______[答案] Tm值相同,而峰高低有差异是表达丰度不同,同样的扩增产物也会出现Tm值有微小差异,一般差异在1度以内都可以接受.融解曲线的纵坐标表示荧光信号对温度的一阶负导数.

空衫仁2182求助,NCBI设计的引物怎么看好不好 -
方吴堵18229934698 ______ 可以用于正式实验的引物必须满足以下条件: a 溶解曲线单峰,窄而尖,否则可能有非特异性扩增;峰的位置横坐标一般在80度以上,这个温度为PCR产物的解链温度,如果在75度附近,可能是引物二聚体,miRNA染料法检测时,溶解曲线的...

空衫仁2182溶解曲线不好荧光定量pcr的数据就用不了吗 -
方吴堵18229934698 ______ 是的.你说的不好时哪种不好?有非特异性扩增峰,只有引物二聚体的溶解曲线,数据都不能用了

空衫仁2182做Realtime PCR时同样的复孔溶解曲线有的单峰特异,有的多峰Realtime PCR第一次做溶解曲线都是好的,后来同样的引物同样的条件和cDNA结果出来的... -
方吴堵18229934698 ______[答案] 可能是cDNA降解,也有可能你检测的片段表达量低,也有可能pcr mix有问题 建议多做几个复孔,选取其中的数据,或者重新设计引物

空衫仁2182怎么在最后一步设置 使其显示溶解曲线(荧光定量PCR,没有溶解曲线,我们是7500fast机器,软件是1.4谢谢 -
方吴堵18229934698 ______ 我用的是BIO-RAD的iQ5,设置溶解曲线的时候是在反应程序设置那里多设置一步,并且在采光那里再设置一下,就好了