pcr溶解曲线分析

敖翔贷3974实时定量PCR的绘制溶解曲线应该从多少度开始升温 -
杨茜竖13692657446 ______ 如果扩增产物只有目标序列的话就应该只有一个峰的. 1.简单的说来,溶解曲线就是在采用荧光染料法进行实时定量PCR时采用的一种分析手段.当体系的温度逐渐升高的时候,体系中的PCR产物慢慢的由双链变成单链,这是一个逐渐变化的...

敖翔贷3974荧光定量pcr溶解曲线为什么会有一个急剧的上升连着急剧下降,形成一个峰. -
杨茜竖13692657446 ______ 随着温度升高,当温度达到Tm值时候,DNA就会变性分成单链的,此时荧光染料不能结合NDA所以检测的荧光型号越来越弱. 你说的出现的峰是荧光性号对温度求导后得到的曲线图,出现峰是因为在接近Tm值的位置荧光性号下降的斜率很快导致在对温度求导后出现峰. 出现单峰说明没有非特异性的结合和引物二聚体的产生.

敖翔贷3974实时荧光定量PCR,溶解曲线怎么判断是否为目的产物 -
杨茜竖13692657446 ______ 根据曲线初步判断,整个实验设计还可以!你做相对定量吗,将样品结果与对照看看基因表达量分析就可以了! 如果绝对定量,需要进一步实验吧!

敖翔贷3974定量PCR法中,Taqman探针法需要做溶解曲线吗?为什么? -
杨茜竖13692657446 ______ 正常情况下是不需要的,溶解曲线是在SYBR Green法中利用染料在DNA解链时释放不发射荧光,而在DNA双链时与其结合发射荧光的原理制作溶解曲线的,而Taqman探针在PCR反应时其寡核苷酸链由于被DNA聚合酶的外切酶活性给切断,所以不能重新再结合故不能形成探针,所以不需要做溶解曲线.再一个,溶解曲线只是为反应体系中判断是否有非特异性扩增提供一个侧面的依据,适用于染料法.而探针法的特异性很高,从这方面来看也是不需要的.

敖翔贷3974荧光定量PCR中扩增曲线能说明什么问题 -
杨茜竖13692657446 ______ 在荧光法定量PCR中溶解曲线直接表示了引物的特异性,如果是单一的峰,那么我们要看的是TM值在哪里,通常情况下都是80---90之间,如果太小那可能扩增出来的不是你想要的片段就是引物二聚体,如果两个峰那就说明出现了非特异性扩增

敖翔贷3974请问实时定量PCR的绘制溶解曲线应该从多少度开始升温?我的实验结果里,溶解曲线在55度时候有个小峰,请问可能是什么原因造成的? -
杨茜竖13692657446 ______[答案] 如果扩增产物只有目标序列的话就应该只有一个峰的.1.简单的说来,溶解曲线就是在采用荧光染料法进行实时定量PCR时采用的一种分析手段.当体系的温度逐渐升高的时候,体系中的PCR产物慢慢的由双链变成单链,这是一个逐渐...

敖翔贷3974rt - pcr中没有溶解曲线的原因是什么?(Ct值有的) -
杨茜竖13692657446 ______ 溶解曲线的意思是:当温度高于扩增产物的TM值时,双链产物变单链,荧光值因为这样的变化而产生变化,根据这一原理,你推算你的体系是是否会在温度变化时产生荧光值的变...

敖翔贷3974溶解曲线不好荧光定量pcr的数据就用不了吗 -
杨茜竖13692657446 ______ 溶解曲线不好,说明有非特异性产物扩增,也就是说PCR信号不是你要检测的那段序列所产生的,很可能有多个非特异性判断.数据就不能要了

敖翔贷3974实时荧光定量PCR结果中溶解曲线的 -
杨茜竖13692657446 ______[答案] 你用的是什么型号的PCR仪?每个PCR仪中的缩写意思都是不一样的

敖翔贷3974荧光定量PCR 溶解曲线与什么有关 -
杨茜竖13692657446 ______ 荧光定量PCR 溶解曲线是验证有无非特异性扩增的, 与引物的溶解温度有关