pcr溶解曲线出不来

鲜韦玲4883RT - PCR有扩增曲线但没有CP值是什么原因 -
莫养轰19373829657 ______ 扩增曲线是怎么样的?最大荧光和最小荧光差多少?是标准的S型曲线么?threshold值设了多少?什么品牌型号的仪器?

鲜韦玲4883rt - pcr的溶解曲线同一个样3个孔tm值不在一起是什么原因 -
莫养轰19373829657 ______ 你设置溶解曲线那一步骤了吗?要是没设,当然不会起峰 可能由于你的引物根本没有把目的片段PCR出来,自然也就没有峰

鲜韦玲4883荧光定量PCR 溶解曲线与什么有关 -
莫养轰19373829657 ______ 荧光定量PCR 溶解曲线是验证有无非特异性扩增的, 与引物的溶解温度有关

鲜韦玲4883RT - PCR融解曲线详解 -
莫养轰19373829657 ______ 融解曲线是荧光定量PCR仪出现后为了考察染料法结果的特异性产生的.大家使用荧光定量PCR的目的(也是荧光定量PCR的宣称优点)有快速、准确及无污染,其中快速的前提之一是不用跑电泳就可以通过扩增曲线考察初始拷贝数的量;准...

鲜韦玲4883荧光定量pcr溶解曲线为什么会有一个急剧的上升连着急剧下降,形成一个峰. -
莫养轰19373829657 ______ 随着温度升高,当温度达到Tm值时候,DNA就会变性分成单链的,此时荧光染料不能结合NDA所以检测的荧光型号越来越弱. 你说的出现的峰是荧光性号对温度求导后得到的曲线图,出现峰是因为在接近Tm值的位置荧光性号下降的斜率很快导致在对温度求导后出现峰. 出现单峰说明没有非特异性的结合和引物二聚体的产生.

鲜韦玲4883定量PCR法中,Taqman探针法需要做溶解曲线吗?为什么? -
莫养轰19373829657 ______ 正常情况下是不需要的,溶解曲线是在SYBR Green法中利用染料在DNA解链时释放不发射荧光,而在DNA双链时与其结合发射荧光的原理制作溶解曲线的,而Taqman探针在PCR反应时其寡核苷酸链由于被DNA聚合酶的外切酶活性给切断,所以不能重新再结合故不能形成探针,所以不需要做溶解曲线.再一个,溶解曲线只是为反应体系中判断是否有非特异性扩增提供一个侧面的依据,适用于染料法.而探针法的特异性很高,从这方面来看也是不需要的.

鲜韦玲4883做Realtime PCR时同样的复孔溶解曲线有的单峰特异,有的多峰Realtime PCR第一次做溶解曲线都是好的,后来同样的引物同样的条件和cDNA结果出来的... -
莫养轰19373829657 ______[答案] 可能是cDNA降解,也有可能你检测的片段表达量低,也有可能pcr mix有问题 建议多做几个复孔,选取其中的数据,或者重新设计引物

鲜韦玲4883做荧光定量时 扩增曲线和溶解曲线都很好 没有出现二聚体 但是为何目的基因的ct值大于30 ,在31左右. -
莫养轰19373829657 ______ 朋友,首先跟你说一下我的经验,其实这里有个误区,其实普通PCR对Realtime PCR的指导意义实在是太小,因为realtime PCR的引物跟普通PCR的引物有很大差别,realtime PCR的引物因为要顾及试验体系的要求,所以在引物性能方面有一...

鲜韦玲4883造成pcr扩增失败的因素有哪些 -
莫养轰19373829657 ______ 任何一步的操作都有可能是导致失败的原因 首先你需要清楚地了解pcr的原理,你的实验步骤,每一步都是在干什么.网上虽然有,可能跟你的实际情况略有差别,就不粘过来了. 主要希望题主明白解决问题的思路,就是每一步操作都会有问题.除了熟悉实验步骤和原理,操作流程之外,做实验过程中也要小心严谨,这样出现问题才好排查到底是哪里可能出错了.

鲜韦玲4883什么是PCR熔解曲线法 -
莫养轰19373829657 ______[答案] PCR熔解曲线分析法是做realtime-pcr时分析,用来确定不同的反应产物,包括非特异性产物的分析方法.原理是在扩增反应完成后,通过逐渐增加温度的同时监测每一步的荧光信号来产生溶解曲线,随着反应中双链DNA变性,荧光染料又回复到游离...