qrt-pcr和rt-qpcr区别

松窦美1745在qRT - PCR中miRNA的颈环引物是怎么设计的,实验需要注意哪些事项 -
池相响13835984794 ______ LZ说的是下游引物吧,下游引物是针对反转录时的茎环引物设计的;LZ首先要知道你的反转录引物的序列,然后设计与反转录引物的非茎环配对的下游定量引物,上游引物则是特异性结合miRNA的引物

松窦美1745qRT - PCR中内参是什么?一个内参够不够 -
池相响13835984794 ______ 有些内参在某些细胞株中有比较大的变化,所以你要查文献,看别人在做这些细胞的时候,用的是什么内参.

松窦美1745基因表达的检测方法有哪些 -
池相响13835984794 ______ 老兄.我扫个盲哈.检测基因表达的方法主要有:表达谱,全转录组的信息,目前最流行平台包括47,000个转录本,检测全基因组的表达变化.简单的经典的方法有Northern Blot,常用的有反转录PCR,定量分析表达的变化qRT-PCR这些都是检测单一转录子的方法.

松窦美1745qrt - pcr目标基因有多种引物 如何选择 -
池相响13835984794 ______ 可以选2-3对引物调试一下,看看那个Ct值比较低,就用哪一个,正常情况下,Ct值都差不多

松窦美1745qrt - pcr两次重复要最大数值一致吗 -
池相响13835984794 ______ 同时做最好,分开几次上机会增加误差,一般都是能在一块板上完成就一次完成.

松窦美1745当用qRT - PCR验证了目的基因的表达后 还有必要用western做验证吗 -
池相响13835984794 ______ 恩 一般都是这样的 比如你这个处理降低了该基因的mRNA的表达量 但可能增强了它的翻译 所以表达出来的蛋白总量还是没有变 所以还是需要做的

松窦美1745qRT - PCR的数据处理问题,error bar应该怎么做 -
池相响13835984794 ______ 这样算: 你先把几次试验的对照组的平均值设为1, 再把每个单独试验对照组的数值算出和这个对照组平均值的差异,就可以计算标准差了. 这么简单的统计分析,用不着SPSS吧, excel就可以解决了.

松窦美1745关于PCR的问题有点糊涂 Real time PCR 和 RT - PCR(逆转录PCR) Q - PCR RT - QPCR -
池相响13835984794 ______ 一般RT-PCR指的就是real time PCR,qPCR基本上与RT-PCR是等同的.没有见过RT-qPCR这样表述的.逆转录后再做PCR这是两个独立的过程,先做逆转录,再做PCR,这里的PCR可以是普通PCR,也可以是qPCR.做逆转录的时候一般是需要用管家基因作为内参的,但是qPCR不一定需要,要看你的目的.通过比较管家基因与目的基因在不同条件下的表达水平的差异,是常用的半定量方法,半定量也加相对定量.相应的有绝对定量,就是绘制标准曲线,测目的基因和病原体的拷贝数

松窦美1745请问什么是实时荧光定量?
池相响13835984794 ______ 实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)/QRT-PCR,是指在PCR反应体系中加入荧光标记物,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过扩增曲线对未知模板进行定量分析的方法.荧光定量PCR不仅实现真正实现了绝,对定量,而且具有灵敏度和特异性、高能实现多重反应、自动化程度高、无污染、实时和准确等特点.

松窦美1745荧光定量相关系数分析能证明扩增效率相同么 -
池相响13835984794 ______ 引物和探针设计不当 为了最高效地设计用于实时荧光定量PCR的引物和探针,我们强烈建议您使用引物设计软件.大多数引物设计程序均包含了可调节的参数以设计最佳的引物和探针.这些参数涉及了引物/探针的Tm值、互补性、二级结构以及...