sirna转染实验步骤

尤和凝3604真核细胞基因的转染方法步骤是什么?求大神帮助 -
吴败耿14741592873 ______ 1.配置TBS-D溶液 100mlTBS加入20%葡萄糖溶液0.5ml,至终浓度为1%. 2.配置DEAE-dextran-DNA-TBS-D转染液 DEAE-dextran 1mg/ml DNA(超螺旋) 5-10ug/ml(DNA浓度根据细胞种类、细胞密度及质粒种类决定,最适浓度经预实验确定)...

尤和凝3604cell signaling technology 的sirna怎么样 -
吴败耿14741592873 ______ 美国波士顿 Cell Signaling Technology (CST) 公司的核心技术是生产”聪明的抗体”.主要是针对活化状态蛋白,包括磷酸化,乙酰化,特异性剪切,亚硝基化以及其他形式活化的蛋白.这一类抗体是用于检测在细胞调解中起重要作用的活化的蛋白质.

尤和凝3604怎样根据sirna干扰靶序列来构建重组慢病毒载体 -
吴败耿14741592873 ______ 原代细胞较难转染,可以先构建慢病毒,再用慢病毒进行转染. 1.将actin基因,放入慢病毒融合表达载体,与荧光蛋白(GFP)融合表达,注意避免移码突变. 2.然后将重组质粒以及辅助质粒共转染细胞,可以用脂质体法,慢病毒配套细胞一般为293. 3....

尤和凝3604DEAE - 葡聚糖介导的转染步骤谁能介绍下? -
吴败耿14741592873 ______ 1. 接种鼠L成纤维细胞浓度为5*105CO2 /孔/皿生长2~3天,当达50%板底面积可用. 2. 乙醇沉淀的4μg的PSV2-neo质粒DNA,空气干燥后溶于40μL的TE中,或取供体DNA. 3. 用10ml 1*PBS、4mL、10%富合生长因子血清的DMEM洗板(皿)...

尤和凝3604有哪些方法可以将sirna导入细胞内 -
吴败耿14741592873 ______ RNAi在哺乳动物细胞中通常用于阻断特定基因的表达从而研究基因的功能.成功的进行RNAi 的问题在于使siRNA导入细胞,将sirna导入细胞内常见的方法是 将靶向特定基因的大约21碱基长短的双链 siRNAs small interfering RNAs.或者是45 50 mer的发夹结构 RNA 转染到细胞.此外通过质粒表达siRNAs 同样可以抑制特定基因的表达.

尤和凝3604如何提高转染效率(转染,质粒,质粒转染,脂质体 -
吴败耿14741592873 ______ 如何提高转染效率(转染,质粒,质粒转染,脂质体 转入质粒的原理:质粒上连的片段转录后能够自身互补形成双链(shRNA),在细胞内被细胞自己剪切成siRNA. 两种转染方法在功能上是一致的.但是siRNA转染以后发挥作用的时间较短,用于短期抑制试验(一般维持一周以内).而因为质粒存在于细胞内比较稳定(载体上含有抗生素标记,可以筛选),能够持续表达产生shRNA,然后不断产生新的siRNA,因此维持作用的时间长(可以超过两周). 另外用质粒还可以同时转入报告基因作为对照,确定质粒确实已经转染进去了.

尤和凝3604...我要做shRNA方面的研究,想通过脂质体把shRNA转到colo205中,但是由于它是半悬浮细胞,我对转染效率以及转染后的筛选不知道怎么弄有人做过这方... -
吴败耿14741592873 ______[答案] 把siRNA带个荧光标记,然后细胞内源表达另一种颜色的荧光蛋白,这样就可以统计转染效率了,筛选也可以通过这样的荧光来区分

尤和凝3604NIH3T3细胞转染后筛选 -
吴败耿14741592873 ______ 一定要做浓度筛选实验.由于生产厂家的不同,生产批次的不同,G418的含量会有较大的差别.虽然NIH3T3这个细胞做转染比较容易的,但是做筛选浓度试验还是非常必要的,我们实验室在做瞬转时RFect-siRNA,在24孔板内设置siRNA梯度实验,每组梯度设置至少2个复孔,转染试剂2-3ul就够了

尤和凝3604请提供稳定转染的protocol转染了几次,都没成功
吴败耿14741592873 ______ 1. 转染前一天,将细胞用胰酶消化、计数并铺板,使转染日细胞融合度为70-90%.在铺板和转染期间避免使用抗生素. 2. 对每孔细胞,在100μl无血清培养基(如OPTI-...

尤和凝3604rnai小鼠体内实验时,尾静脉注射siRNA后,怎样观察肝细胞和脾细胞摄取siRNA的比例?
吴败耿14741592873 ______ siRNA用荧光标记.注射后在规定时间去肝和脾,用流式细胞仪计数阳性细胞