菌液pcr的过程
“红管管，白签签，大家一起做核酸。”在群众眼中，核酸检测很简单，只有两步：扫码采样和查询报告。但事实上，这在常人眼中看似简单的两步背后，却凝聚着核酸检测人员不为人知的辛苦付出。今天，我们就来一起探访宁津县人民医院检验科PCR实验室，带大家了解核酸检测人员的工作。
核酸检测人员是抗疫战中的排雷兵，每天与新冠病毒正面 “交锋”。进入实验室之前，他们必须全身“武装”，N95口罩、防护服、护目镜、防护面屏、双层手套、防水靴套等用品的穿戴必须执行严格要求，容不得一丝马虎。
“实验室里检验人员每天要不断重复着样本核对签收、样本灭活、手工加样、核酸提取、上机扩增、结果分析、出具结果报告等多个步骤，整个过程环环相扣，都只能纯手工操作，一个动作甚至需要重复上千次。”宁津县人民医院检验科检验技师武雅茹说。
只要进入实验室，检验人员不喝水、不进食、不如厕，一直坚持到检验完成。加上防护服密不透风，工作时间又长，每轮实验下来，都是对检验师体力和意志力的双重考验。
在PCR实验室，这个被称为“距离病毒最近的地方”，一份份核酸检测结果从这里出来。这里有一群抗疫“幕后无名英雄”，核酸检测实验室是他们的战场，他们默默地坚守着自己的岗位，履行着自己的职责和使命。
宁津县人民医院检验科主任陈春杰说：“我们检验科下设6个分组，包括分子组（PCR实验室）、临检组、生化组、免疫组、微生物组、艾滋病筛查组，总共有26名工作人员，其中PCR实验室6人，分为两班，白班和夜班，每个班次12个小时，这次核酸检测我们负责检测部分乡镇送来的核酸样本以及本院的医务人员和患者、陪人样本，愿检尽检样本，院外环境、重点场所环境样本，承接德城区样本，最高的时候一次接收达到4000多管。标本量多的时候，检验科全体人员24小时在岗在位，随时调整工作班次，科室还抽调了5人外出支援，所以很多时候都是其他小组做完日常检测工作后紧接着就去PCR实验室，中间只有30分钟吃饭时间。但我们不是在孤单奋斗，在医院和输血科、病理科等兄弟科室的大力支持下，我们确保了核酸结果及时准确地发出。8月28日以来，共检测核酸样本8000多管，共计17万人次。”
在宁津县人民医院核酸检测实验室，有三个功能分区，一区负责试剂的准备和实验耗材，二区负责接收标本、拆包、排板、编号、加样、扫码等，三区是扩增分析区。核酸检测的每一步都需要人工操作。从开箱拿出采样管，到核酸提取、体系配置、扩增检测、结果分析等，每个看起来有条不紊的操作程序背后，都充满了高度风险。检验师杨璐瑶与同事们穿着白色防护服，和病毒面对面、“零距离”接触，小心翼翼，全力筑牢生命安全防护线。
杨璐瑶：“穿上防护服的那一刻，就会有一份责任，就是这份责任让我们认真对待每一份标本，将标本精准高效地检测出来。”
一份“阴性”的核酸检测报告，是老百姓心中的一颗定心丸，更是宁津县打赢疫情防控的最大动力。一份份样本、一组组数据，筑起一道道病毒“防火墙”，宁津县人民医院马力全开单日最高检验核酸数可达6.4万人，用无畏姿态诠释了宁医人的担当！ （陈伟伟）
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任友厕4623PCR法检测沙门氏菌的操作过程 -
辛妮龙18565607304 ______ 首先你要有检测沙门氏菌的特异性引物! 然后将PCR的各个组分混合到一起,根据引物调整好退火温度和延伸时间25-30个循环后电泳看结果
任友厕4623军团菌PCR鉴定,为什么要进行核酸的提取?他的步骤是怎样的?
辛妮龙18565607304 ______ 不管是什么菌,进行PCR都是以核酸为模板的,所以要提取核酸,提取细菌DNA的方法一般是煮沸裂解法,配个DNA提取液煮一煮就行.
任友厕4623手工法 革兰阴性菌总DNA提取模板做PCR 经验方法 -
辛妮龙18565607304 ______ 质粒的方法就溶液123的方法就可以了 DNA可以参考提取动物、植物DNA的方法 更快速的方法可以参考我们做菌落pcr的方法,这个方法是采用少量的菌作为模板 然后加入pcr反应液,在pcr高温预变性的过程中菌细胞壁会裂解掉,dna和质粒都释放到溶液中作为模板参与扩增. 如果你有96孔深板(1-2ml)以及排枪最好了,省事省时.牙签或者枪头挑菌挑一点点(只要沾到菌落就行,不要求大块,大块反而不好),96孔每孔加500ul培养液,挑96个,然后拿去摇菌,培养3-5小时,菌液就可以直接作为pcr的模板了. 只要引物好用,基本都可以扩出来的.我们鉴定阳性克隆都这样做, 你可以参考
任友厕4623单菌落菌液PCR检测 -
辛妮龙18565607304 ______ 博凌科为生物科技-为你解答:直接挑曲单克隆,一般使用特异引物,在体系中进行PCR即可,细胞热解后DNA释放就能进行PCR扩增~
任友厕4623菌液直接PCR
辛妮龙18565607304 ______ 其实你原体系中7微升都太多了.我做50微升体系最多加3微升模板. 菌液PCR只需要用枪头沾取菌落,或者加入2微升左右菌液即可.预变性时间可稍微延长.如果引物特异性好的话,和用DNA模板效果差不多.
任友厕4623新手..关于菌液pcr ..还有什么不清楚我再补充.. 万分感谢!!! -
辛妮龙18565607304 ______ 如果排除操作、试剂及载体污染的话,那么你之前做的3引物菌P结果很可能是假阳性(假阳性主要考虑来源于未与载体结合的插入片段).很好奇你挑选做菌P的克隆数量.建议你多挑几个克隆,同时在菌P时加入一组以一个通用引物一个卫星引物组成的上下游引物的试验.有兴趣的话还可以选择菌P结果比较好的菌液做个小抽,然后双酶切以证实是否阳性克隆.
任友厕4623PCR做菌液筛选,只有阳性对照有条带,最可能的原因是什么? -
辛妮龙18565607304 ______ PCR没有结果有很多原因,你作阳性对照应该是用原来的基因,模版是质粒还是cDNA?如果菌液PCR没有结果,建议按照以下程序排查:1.摇菌是否出了问题.2.菌液PCR前菌液破裂措施做是否充足.3.PCR过程有没有问题,引物设置,菌液的量的控制. 做个双酶切对照,如果还没有,重做吧兄弟
任友厕4623谁知道菌液已经放了一段时间了,在做菌液PCR之前需要先培养多长时间? -
辛妮龙18565607304 ______ 37度培养超过24小时的话,里面大部分菌都是不带质粒的,但PCR应该还不成问题,更长时间的话,可能长出其他的杂菌,带质粒的菌如果全都死了,就不能PCR了,但你应该还能活化,因为总会有极少量菌带质粒的,但你可能P不出来.
任友厕4623菌种分离的一般过程 -
辛妮龙18565607304 ______ 1. 将液体的混合菌液通过在选择性培养基上划线(或涂版,视菌液浓度和活性而定),分离出单菌落. 2. 挑取单菌落液体培养,鉴定.
任友厕4623pcr技术的四种原料是什么 -
辛妮龙18565607304 ______ 就胞嘧啶而言是dctp.就四个碱基的mix则为dntp(n=a,t,c,g).因为是以此底物为原料,要加在3'-OH上需要高能建.dnmp是没有高能磷酸键的,而dntp则有两个.但最后在DNA链中的形式是dnmp.