溶解曲线pcr没有起峰

权骨拜1325做实时定量PCR时内参引物的水对照总起峰怎么回事(重复几次Cp值都是32左右,不能达到35) -
祖显炊18399807359 ______ 你做的是DNA的实时定量PCR,还是cDNA的? 模板是DNA的话可以将Ct控制在10-30之间,最大的Ct值在28以内,这样32以后的Ct在计算的时候可以忽略掉.模板是cDNA的话,有些Ct本来就很大,做水的时候更要小心了,戴好口罩手套,仔细着点. 你可以看看溶解曲线的图,只要那张图没有起峰的话,就应该不是水中有污染;如果有峰,且温度非常低,可能是引物二聚体;如果是正儿八经的峰,那就是污染了,做的时候小心些.

权骨拜1325荧光定量PCR 溶解曲线与什么有关 -
祖显炊18399807359 ______ 荧光定量PCR 溶解曲线是验证有无非特异性扩增的, 与引物的溶解温度有关

权骨拜1325realtime PCR的溶解曲线只有一个峰为什么会有二条带? -
祖显炊18399807359 ______ 一个峰不会出现2条带 可能是另一个峰很不明显 我遇到过很细微的峰也能跑出带来 你再检查下溶解曲线

权骨拜1325实时定量PCR的绘制溶解曲线应该从多少度开始升温 -
祖显炊18399807359 ______ 如果扩增产物只有目标序列的话就应该只有一个峰的. 1.简单的说来,溶解曲线就是在采用荧光染料法进行实时定量PCR时采用的一种分析手段.当体系的温度逐渐升高的时候,体系中的PCR产物慢慢的由双链变成单链,这是一个逐渐变化的...

权骨拜1325荧光定量pcr溶解曲线为什么会有一个急剧的上升连着急剧下降,形成一个峰. -
祖显炊18399807359 ______ 随着温度升高,当温度达到Tm值时候,DNA就会变性分成单链的,此时荧光染料不能结合NDA所以检测的荧光型号越来越弱. 你说的出现的峰是荧光性号对温度求导后得到的曲线图,出现峰是因为在接近Tm值的位置荧光性号下降的斜率很快导致在对温度求导后出现峰. 出现单峰说明没有非特异性的结合和引物二聚体的产生.

权骨拜1325做Realtime PCR时同样的复孔溶解曲线有的单峰特异,有的多峰Realtime PCR第一次做溶解曲线都是好的,后来同样的引物同样的条件和cDNA结果出来的... -
祖显炊18399807359 ______[答案] 可能是cDNA降解,也有可能你检测的片段表达量低,也有可能pcr mix有问题 建议多做几个复孔,选取其中的数据,或者重新设计引物

权骨拜1325请问实时定量PCR的绘制溶解曲线应该从多少度开始升温?我的实验结果里,溶解曲线在55度时候有个小峰,请问可能是什么原因造成的? -
祖显炊18399807359 ______[答案] 如果扩增产物只有目标序列的话就应该只有一个峰的.1.简单的说来,溶解曲线就是在采用荧光染料法进行实时定量PCR时采用的一种分析手段.当体系的温度逐渐升高的时候,体系中的PCR产物慢慢的由双链变成单链,这是一个逐渐...

权骨拜1325定量pcr中,空白对照曲线什么样 -
祖显炊18399807359 ______ 你说的空白对照应该是不加模板,用水代替模板吧.空白对照的溶解曲线和扩增曲线都是没有峰的.希望可以帮到你

权骨拜1325谁能具体解释一下荧光定量PCR中溶解曲线的意思以及作用? -
祖显炊18399807359 ______[答案] 用Syber Green方法做完PCR后,用来判断产物是否相对专一.反应结束后,逐渐加温.和Syber Green分子结合的PCR产物随温度升高逐渐变为单链,就不能在和Syber Green结合.一般每加温一度,读一次信号.当温度到达PCR产物的Tm时,产物解离...

权骨拜1325定量PCR试验,模板、引物都一样,只是mix分别用2家公司的,熔解曲线都是单峰,但峰值却相差2 - 3度,为什么 -
祖显炊18399807359 ______[答案] mix中镁离子含量、缓冲液组成等等都是可以影响到溶解曲线出峰值的.这个和Tm的影响方式差不多.