qpcr溶解曲线峰比较低

终夜波2495荧光定量pcr溶解曲线为什么会有一个急剧的上升连着急剧下降,形成一个峰. -
华承德19730539432 ______ 随着温度升高,当温度达到Tm值时候,DNA就会变性分成单链的,此时荧光染料不能结合NDA所以检测的荧光型号越来越弱. 你说的出现的峰是荧光性号对温度求导后得到的曲线图,出现峰是因为在接近Tm值的位置荧光性号下降的斜率很快导致在对温度求导后出现峰. 出现单峰说明没有非特异性的结合和引物二聚体的产生.

终夜波2495如何看一个引物设计的好坏 -
华承德19730539432 ______ 通过引物的参数检测 引物设计参数: a 引物长度一般在20bp左右,上下游引物碱基长度不要相差超过4个碱基. b 引物退火温度一般在58度,不同软件TM使用不同的算法,primer3,primer 5,primer 6,primer express等一般可以设置在55-58度,...

终夜波2495我想请问你关于real - time PCR 中溶解曲线的横轴和纵轴的意义?我做的两个样品里峰值在X的同样的位置,但一个样品的峰高,一个低.电泳出来的条带大小... -
华承德19730539432 ______[答案] 横坐标是温度,每个温度点一个.一般从60到98度 纵坐标是荧光强度的变化值(不是强度本身).一开始加热的时候,虽然荧光强度比较强,但是由于双链没有解离,所以荧光强度保持不变.当加热接近于PCR产物Tm时,双链开始解离,荧光强度变小...

终夜波2495我是荧光定量pcr初学者,现在想做定量试验,最近做了个标准曲线,可是点都不在线上,内和目的基因都是 -
华承德19730539432 ______ 条件是没有经过优化的,可能因为是不是最近反应体系,另外也有可能是因为模版质量不好的关系 先多看点资料

终夜波2495谁能具体解释一下荧光定量PCR中溶解曲线的意思以及作用? -
华承德19730539432 ______[答案] 用Syber Green方法做完PCR后,用来判断产物是否相对专一.反应结束后,逐渐加温.和Syber Green分子结合的PCR产物随... 当温度到达PCR产物的Tm时,产物解离一下增多.曲线的横坐标是温度,而纵坐标是荧光信号的变化!开始加热,信号变化...

终夜波2495q - pcr融解曲线主峰前面有个向下的小峰,怎么回事? -
华承德19730539432 ______ 有点波动可能是由于仪器精密度引起的,不必太在意

终夜波2495溶解曲线不好荧光定量pcr的数据就用不了吗 -
华承德19730539432 ______ 是的.你说的不好时哪种不好?有非特异性扩增峰,只有引物二聚体的溶解曲线,数据都不能用了

终夜波2495请问实时定量PCR的绘制溶解曲线应该从多少度开始升温?我的实验结果里,溶解曲线在55度时候有个小峰,请问可能是什么原因造成的? -
华承德19730539432 ______[答案] 如果扩增产物只有目标序列的话就应该只有一个峰的.1.简单的说来,溶解曲线就是在采用荧光染料法进行实时定量PCR时采用的一种分析手段.当体系的温度逐渐升高的时候,体系中的PCR产物慢慢的由双链变成单链,这是一个逐渐...

终夜波2495定量PCR试验,模板、引物都一样,只是mix分别用2家公司的,熔解曲线都是单峰,但峰值却相差2 - 3度,为什么 -
华承德19730539432 ______[答案] mix中镁离子含量、缓冲液组成等等都是可以影响到溶解曲线出峰值的.这个和Tm的影响方式差不多.

终夜波2495做Realtime PCR时同样的复孔溶解曲线有的单峰特异,有的多峰Realtime PCR第一次做溶解曲线都是好的,后来同样的引物同样的条件和cDNA结果出来的... -
华承德19730539432 ______[答案] 可能是cDNA降解,也有可能你检测的片段表达量低,也有可能pcr mix有问题 建议多做几个复孔,选取其中的数据,或者重新设计引物