qpcr时rna浓度最好

赫向巧3019实验菜鸟求问:RT - PCR(检测mRNA的)是不是就是realtimePCR的一种啊?如果不是的话它们有什么区别呢? -
游瑞狡15023341197 ______ 不相同,RT-PCR是逆转录PCR,它是以RNA为模板,反转录形成DNA的PCR反应,主要是为了去除DNA中的内含子.后者是实时定量PCR,其以DNA为模板,主要是为了测定初始时模板的浓度.

赫向巧3019什么是总RNA 和Poly A RNA -
游瑞狡15023341197 ______ 你说的实验应该是RT-qPCR,这个实验的主要目的就是检测RNA的含量的,所以一开始其实是很难给出一个具体的值的.通常建议根据所用的逆转录酶每个反应的RNA的量的大致需求,先完成逆转录反应,例如,下面就列出了某一种逆转录酶要求的模板范围.逆转录酶越好,这个范围就会越宽,主要是可以用的RNA量就可以更少.totalRNA——1pg-5μgpoly(A)RNA——0.1pg-500ngspecificRNA——0.01pg-500ng等到将RNA都逆转录为cDNA后,再进行qPCR的实验.这时候可以将cDNA稀释几个梯度,以获得理想的Cq值.

赫向巧3019如何选择荧光定量检测法之SYBR Green I -
游瑞狡15023341197 ______ 市面上的RT-qPCR试剂盒大多退火温度都在42度,能到50度及以上的极少,因为酶不支持.60度以上到65度实际是最好的,可以消除RNA的二级结构.SYBR Green I是非饱和染料,片段长度太长,荧光信号会出现偏差,不死扩不出来,而是荧光信号出现偏差后的错误信息.

赫向巧3019反向PCR怎么做 -
游瑞狡15023341197 ______ 反向pcr(inverse pcr)反向pcr是一种多聚合酶链式反应(pcr)应用的方法,可使已知序列的核心区边侧的未知rma成几何级数扩增.用适当的限制性内切裂解含核心区的rma,以产生适合于pcr扩增大小的片段,然后片段的末端再连接形成环状分子.pcr的引物同源于环上核心区的末端序列,但其方向可使链的延长经过环上的未知区而不是分开引物的核心区.这种反向pcr方法可用于扩增本来就在核心区旁边的序.

赫向巧3019荧光定量pcr与RNA的提取有什么关系?急急急.谢谢了 -
游瑞狡15023341197 ______ 荧光定量PCR和普通的PCR都需要先进行提取RNA,RNA经过RT变成cDNA,然后进行PCR或荧光定量PCR,现在很多试剂盒把RT-PCR合并子啊一起反应.

赫向巧3019提取RNA的浓度能说明细胞的质量吗 -
游瑞狡15023341197 ______ RNA浓度收很多因素影响的,例如细胞的活性,酶的活性,提取过程中的影响.所以很难用RNA的浓度来判断细胞的质量.

赫向巧3019如果要做qPCR的话,我是直接保存取出的细胞好,还是先提取RNA再保存好?多谢啦 -
游瑞狡15023341197 ______ 最好是用状态较好的细胞提取RNA,反转录成cDNA,然后再qPCR. (cDNA保存时间较长一点)

赫向巧3019小分子RNA的检测方法 -
游瑞狡15023341197 ______ 实时荧光定量PCR技术是1996年由美国Applied biosystems公司推出在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术.该技术在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,使每一个循环变得“可见”,...

赫向巧3019poly(A) RNA 是什么意思 -
游瑞狡15023341197 ______ 多聚腺嘌呤核糖核苷酸 就是很多个A连在一起组成的RNA啦 原核生物信使RNA的尾部就是POLY A

赫向巧3019qPCR 4通道和 6 、8 通道有什么区别 -
游瑞狡15023341197 ______[答案] 楼主说的好像是qPCR机器能够读取的荧光频段啊.我本人只做过单色荧光的qPCR,对于多个目标同时反应的qPCR只听说过. 因为多个引物对,探针,同时在一锅粥里面,其交互作用及争夺酶和核苷酸等扩增资源,以及荧光跨频段干扰的情况非常复...