rna浓度测定分析

在2023年欧洲肝脏年会上（EASL2023），研究人员介绍了加拿大杨梅生物制药公司（Arbutus Biopharma）研发的一种已终止乙肝创新药AB-836的最新科学研究进展。

参与AB-836-001受试者HBVDNA平均值和个体Log10与基线的变化，来源Arbutus

AB-836是一种口服、泛基因型、衣壳组装调节剂（CAM-E），通过与HBV核心蛋白结合并加速衣壳组装来阻止HBV前基因组RNA（pgRNA）的封装。之前的体外分析显示，核心蛋白变体 T33N 和 I105T 对 AB-836 的敏感性降低，半最大效应浓度EC50差异倍数变化分别为 64.8 和 8.31。

第二代和第三代 CAM-E抑制剂对野生型和核心蛋白变体的体外效力，来源Arbutus

在先前一项首次人体临床研究（AB-836-001）的数据显示，AB-836可使平均HBVDNA从基线大幅下降，分别为2.66 log10（F组，50mg）、3.04 log10（G组，100mg）和3.55 log10（H组，200mg），且治疗后病毒滴度未出现反弹。由于安全性问题，AB-836已经停止研发。本研究描述的是，HBV核心蛋白变体的流行情况及其对AB-836病毒学应答的影响。

从48名参加AB-836-001的受试者（每组AB-836与安慰剂的随机比例为10:2）的血浆中提取HBVDNA，这些受试者分别以50mg, 100mg或200mg的剂量使用AB-836，连续28天。提取的DNA样本经过HBV特异性PCR扩增，然后进行Illumina MiSeq新一代测序。使用基于细胞的体外系统测定了HBV核心蛋白变体的病毒适应性和对HBV抑制剂的敏感性，该系统通过定点突变技术将单点突变引入HBV复制质粒，然后转染到HepG2细胞中。

接受AB-836治疗的受试者均未出现治疗后病毒反弹。分析了位于AB-836结合位点及其附近的31个氨基酸位点频率>1%的HBV核心变异。从基线到第28天（治疗结束），未观察到核心变异体的富集。在Y38、I105、T109、T114、I116和Y118等氨基酸位点发现了频率较高的变异体；然而，在基线检测到核心变异体的受试者中，HBVDNA下降率并无差异。

在细胞培养中，HBV核心变异体L30F、T33N、T33Q、L37Q和I105T分别导致AB-836 EC50倍数变化为4.7、64.8、42.4、20.8和8.3。对包括Y38F/H、I105V、T109M/I/S、T114I、Y118F、Y132F 和 Y38F+T109S 双变异体在内的更多核心变异体进行的测试表明，这些变异体对AB-836的活性没有影响。

本研究来源Arbutus，EASL2023

综上所述，研究人员给出该研究结论是，在接受28天AB-836治疗的受试者中，未观察到病毒突破或HBV核心蛋白耐药变体的富集。在Y38、I105、T109、T114 和 I116 等氨基酸位点，观察到多种核心蛋白变异出现的频率较高，这表明病毒在这些位点具有可塑性。

小番健康结语：AB-836是一种衣壳抑制剂，在2022年年中的1期临床试验中观察到新的安全信号，Arbutus因而决定在AB-836-001研究中额外对新的一批健康志愿者进行更长时间给药以澄清观察到这些安全信号，结果表明，有2名受试者接受AB-836超20天后出现低级别ALT升高，2022年11月，Arbutus决定基于发现这些额外安全信号，停止AB-836研发。

本届欧肝会中，研究人员描述的有关AB-836新进展指，在慢性乙型肝炎患者中使用衣壳抑制剂AB-836观察到乙型肝炎病毒核心蛋白变异图谱（即上述研究）。在EASL2023，Arbutus Bio带来的乙肝创新药相关新进展有两项，其中AB-729（RNAi）是Arbutus当前领先的在研阶段乙肝候选药物处于II期。

曲狡晨4820如何用RT - qPCR检测RNA浓度 -
温供红13251062179 ______ 提RNA你会吧... 反转录你会吧...如果只是检测一般的mRNA的表达量 就用poly T反转录就可以了 如果是特殊的必须去另外合成特异引物 如果你想得到确切的浓度值 那必须在做RT的时候检测一个标准品 就是这里面东西的浓度你是确切知道的 然后做一条标准品曲线 然后拿你要检测的那个得到的值带到那个曲线里面就算出浓度了 大部分时候都是检测相对含量 就是这个mRNA在不同东西里面的比较 那就不用做标准品曲线 直接把得到的几个值比较下关系就可以了 大部分检测用的内参都是GAPDH 其他还有U6 U7可选

曲狡晨4820如何确定RNA质量?有哪些方法?
温供红13251062179 ______ 检测RNA溶液的吸光度 280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景(溶液浑浊度)、盐浓度和蛋白等有机物的值.一般的,我们只看OD260/OD280(Ratio,R).1.82.0时,我们认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍...

曲狡晨4820试剂盒提取RNA 的浓度是多少?! -
温供红13251062179 ______[答案] 这个得具体分析 要看你提取的是什么材料,用的是什么试剂盒等等等 细胞的破解效率,蛋白质的变性效率都会影响RNA提取的得率.比如天根的试剂盒的得率就在20-80ug之间 蛋白质、DNA和糖类等均会影响RNA的纯度,而导致影响测定的RNA的浓度

曲狡晨4820RNA质量检测后的数据应如何分析 -
温供红13251062179 ______ 看260/230的比值,DNA为1.8左右,RNA为2.0,实际操作时通常大于2,所以1.9-2.2之间的RNA都是可以的.其次是看浓度, 一般提取也应当达到100ug/ul以上,材料适量的话.如有用,请采用.

曲狡晨4820酵母rna含量测定的方法有几种 -
温供红13251062179 ______ 酵母rna含量测定的方法有几种(1) 取洁净的血球计数板一块,在计数室上盖上一块盖玻片.(2) 将酵母菌液摇匀,用滴管吸取少许,从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴(不宜过多),使菌液沿两玻片间自行渗入计数...

曲狡晨4820请介绍 苔黑酶法 -
温供红13251062179 ______ 苔黑酚(地衣酚)法是一种核酸的定量测定法. RNA含量测定,除可用紫外吸收法及定磷法外,常用地衣酚法测定.其反应原理是:当RNA与浓盐酸共热时,即发生降解,形成的核糖继而转变成糠醛,后者与3,5-二羟基甲苯(地衣酚orcinol)反应,在Fe 3+或Cu 2+催化下,生成鲜绿色复合物.反应产物在670nm处有最大吸收.RNA浓度在20—250μg·ml-1范围内,光吸收与RNA浓度成正比.地衣酚法特异性差,凡戊糖均有此反应,DNA和其他杂质也能与地衣酚反应产生类似颜色.因此,测定PNA时可先测得DNA含量再计算RNA含量.

曲狡晨4820进行荧光定量pcr实验时,对提取RNA质量要求多高? -
温供红13251062179 ______[答案] 最好用核酸蛋白测量仪测定一下RNA的浓度,将每个样本的RNA浓度调整一致比较好.

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温供红13251062179 ______ rtpcr时提取rna的浓度和纯度要求:浓度20ng/ul以上足够了,如果用的是组织提取,浓度一般很高,可以达到几百甚至几千.如果你用的是病毒、少量细胞,浓度低一些也...

曲狡晨4820提取RNA的浓度能说明细胞的质量吗
温供红13251062179 ______ RNA浓度收很多因素影响的,例如细胞的活性,酶的活性,提取过程中的影响.所以很难用RNA的浓度来判断细胞的质量.