takara双酶切表
胡柿利2697用Takara的BamH 1和Xho 1做同步双酶切,但是BamH 1的最佳温度是30℃而Xho 1是37℃,这反应温度应该怎么选 -
嵇质纪19497735783 ______[答案] 37度放心切,没问题.不要小看BamHI,这个酶的效率很高的.一般有星活性的酶都不担心切不开,而是担心切多了=.=如果一定担心温度的问题,或者最后实验结果是37度切不开,则考虑以下两种方法:1. BamHI和XhoI都是常用酶,比较...
胡柿利2697为什么酶切实验要求加样迅速,要在冰上进行操作? -
嵇质纪19497735783 ______ 连接前最好将水、插入片段和载体混合好以后置于45度水浴5min,马上置于冰上冷却,再加入buffer和ligase. 双酶切时间及其体系:需要强调的是很多人建议酶切过夜,其实完全没有必要,我一般酶切3个小时,其实1个小时已经足够.应用大...
胡柿利2697用超声波和酶切DNA得到的结果有什么区别,电泳后如何分布? -
嵇质纪19497735783 ______ 我认为主要区别是: 超声破碎的话是随机的,酶切的话不是随机的,酶切位点是特定的. 当然酶切时间和酶量都是要控制好.
胡柿利2697质粒双酶切后怎么会这个样子 -
嵇质纪19497735783 ______ 线性化的跑得最慢. 质粒酶切后,和没有酶切的对照相比.应该会多出一条带,这条带应该是跑得最慢的,也就是显得比原来的更大.酶切的不彻底的话,原来的那几条带也可能存在wjswj(站内联系TA)酶切之前你看到的应该是超螺旋,所以显的比较小:)zbq-92(站内联系TA)超螺旋的跑的最快,其次是线性的DNA,最后跑的最慢的是带缺口(即开环)的.用碱裂解法提取质粒看不到线性的带,只有其余的两条,但不一定是那一条亮. 如果你的超螺旋那条特别亮,酶切后同样大小的DNA片段,由于超螺旋变为线性,电泳就会显示比超螺旋的带大.
胡柿利2697sall和Ecorl能双酶切吗?酶切体系和条件如何sall和Ecorl能双酶切吗?酶切反应体系和条件如何,想做连接来 -
嵇质纪19497735783 ______[答案] 可以,用Takara得酶,缓冲buffer用 一成得buffer H, 其他反映条件同普通反应.我常用50uL反映体系,5ulbuffer 两种酶各1ul,其他得DNA和水补充
胡柿利2697双酶切体系是什么意思 -
嵇质纪19497735783 ______ 双酶切反应 (Double Digests) 1、同步双酶切 同步双酶切是一种省时省力的常用方法.选择能让两种酶同时作用的最佳缓冲液是非常重要的一步.NEB每一种酶都随酶提供相应的最佳NEBuffer,以保证100%的酶活性.NEBuffer的组成及内切酶在...
胡柿利2697双酶切酶切体系和buffer怎么设计比较合适? -
嵇质纪19497735783 ______[答案] 体系不管多大,都有相应的buffer,只要将buffer变为1X工作浓度就行了,两个同时切的话,需要注意酶的量,看单位是多少,一般是1ul的酶切1ug的质粒或者其它DNA序列,尽量酶的体积不能超过体系的10%,因为里面含有甘油,可能会影响酶切效...
胡柿利2697若DNA需要使用两种酶进行酶切,应如何进行? -
嵇质纪19497735783 ______[答案] 如果能够找到让两种酶同时作用的最佳缓冲液NEBuffer,那就可以同时双酶切.如果找不到就只能采用分步酶切.分步酶切应从反应要求盐浓度低的酶开始,酶切完毕后再调整盐浓度直至满足第二种酶的要求,然后加入第二种酶完成双酶切反应....
胡柿利2697对于载体的单酶切和双酶切,胶图分别会如何?为什么会这样啊? -
嵇质纪19497735783 ______[答案] 单酶切一个电泳道上会有几个比较亮的带,而且你所根据基因大小所选择的条带内也不一定是你要的.原因是单酶切形成的粘性末端完全相同,就像拼图,除了内容不同,两边完全切合.所以结合方式过多,可能性也多,如质粒和目的基...
胡柿利2697转化后菌液pcr有目的条带,然后提质粒和双酶切验证.但是没有得到目的条带. -
嵇质纪19497735783 ______ 我觉得用elution buffer没太大的影响,如果你非要觉得不好的话,只能在转化一遍重新提质粒或者抽成干粉再加水.我们一般用水就行.实在不行去测序呀. 提的质粒和空质粒可以比较,如果你插入的基因足够大,实在不行多跑跑.然后看大小比较. 酶切的话还是要看你的酶的活性.要是快切酶的话只要五分钟,要是慢的话要三四个小时.(我用的是takara的) 是不是你酶切的量太少了,我一般50ul的体系要酶切1ug以上的,还要多跑跑,跑个十分钟以上吧. 我也做了个克隆用了很长时间,实在不行就买点贵的酶,能保证一次成功呀.