定量pcr溶解曲线设置

訾红祥3415定量PCR法中,Taqman探针法需要做溶解曲线吗?为什么 -
吉咳禄18698241499 ______ 正常情况下是不需要的,溶解曲线是在SYBR Green法中利用染料在DNA解链时释放不发射荧光,而在DNA双链时与其结合发射荧光的原理制作溶解曲线的,而Taqman探针在PCR反应时其寡核苷酸链由于被DNA聚合酶的外切酶活性给切断,所以不能重新再结合故不能形成探针,所以不需要做溶解曲线.再一个,溶解曲线只是为反应体系中判断是否有非特异性扩增提供一个侧面的依据,适用于染料法.而探针法的特异性很高,从这方面来看也是不需要的.

訾红祥3415如何看一个引物设计的好坏 -
吉咳禄18698241499 ______ 通过引物的参数检测 引物设计参数: a 引物长度一般在20bp左右,上下游引物碱基长度不要相差超过4个碱基. b 引物退火温度一般在58度,不同软件TM使用不同的算法,primer3,primer 5,primer 6,primer express等一般可以设置在55-58度,...

訾红祥3415运用pcr溶解曲线分析怎样计算结果 -
吉咳禄18698241499 ______ 如果有标准曲线,按照标准曲线计算. 一般都是相对量.则用delta delta CT方法来计算.举例如下: 对照组基因A的CT值为20, 内参(比如βactin)CT值15.实验组基因A CT值18,内参CT值14. 首先算加样量:delta CT=15-14=1.2的1次方是2.也就是说.

訾红祥3415溶解曲线不好荧光定量pcr的数据就用不了吗 -
吉咳禄18698241499 ______ 溶解曲线不好,说明有非特异性产物扩增,也就是说PCR信号不是你要检测的那段序列所产生的,很可能有多个非特异性判断.数据就不能要了

訾红祥3415我是荧光定量pcr初学者,现在想做定量试验,最近做了个标准曲线,可是点都不在线上,内和目的基因都是 -
吉咳禄18698241499 ______ 条件是没有经过优化的,可能因为是不是最近反应体系,另外也有可能是因为模版质量不好的关系 先多看点资料

訾红祥3415荧光定量PCR 溶解曲线与什么有关 -
吉咳禄18698241499 ______ 荧光定量PCR 溶解曲线是验证有无非特异性扩增的, 与引物的溶解温度有关

訾红祥3415如何分析定量pcr 溶解曲线 -
吉咳禄18698241499 ______ 可以看看有几个峰,以及峰出现的位置.每个峰代表有一种产物,如果有两个峰甚至多个峰,说明引物不特异,你得到的Ct值是不可信的.还有如果出现峰的温度低,很可能是Dimer,而不是你的目的产物.如果你相同样品各管的溶解曲线都只有一个尖锐的峰,而且不是Dimer,说明你的扩增的产物是稳定正确的,数据可以采用.它只是反映PCR完后,产物的情况,不能得出Ct值.

訾红祥3415荧光定量PCR引物设计
吉咳禄18698241499 ______ 完全可以,PCR长度从50bp到数百都可以,不止局限于150-300个碱基对.楼上说的有道理,但是有一点要注意,最好计算一下扩增片段的Tm值,这样做溶解曲线的时候,光有一个峰还不够,而且得到的TM和你计算的Tm相吻合才行. 是否在翻译区没有影响.

訾红祥3415实时定量pcr引物tm值和溶解曲线横坐标的tm是一回事么? -
吉咳禄18698241499 ______ TM是当50%的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度.Tm对于设定PCR退火温度是必需的.Tm可采用下列公式计算:Tm=2(A+T) + 4(G+C).

訾红祥3415如何设计sybrgreen法荧光定量pcr引物 -
吉咳禄18698241499 ______ 引物 荧光定量PCR 是利用荧光定量PCR 仪(如ABI 7500、stepone、ROChe LightCycler、Bio-Rad CFX96 等)通过实时追踪 PCR 每一步循环的荧光信号 值来达到对起始模板量的定量分析.一次成功的荧光定量 PCR 反应除了需要稳 定的仪器...