qpcr直接用菌液当模板

毋舍娜2968做pcr的时候模板可以直接用冻存管里加了甘油的菌液吗 -
赖谢翠17232382806 ______ 在不加任何条件下直接冻存细胞时,细胞内和外环境中的水都会形成冰晶,能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、ph改变、蛋白变性等,能引起细胞死亡.如向培养液加入保护剂,可使冰点降低.在缓慢的冻结条件下,能使细胞内水份在冻结前透出细胞.贮存在-130℃以下的低温中能减少冰晶的形成. 细胞复苏时速度要快,使之迅速通过细胞最易受损的-5~0℃,细胞仍能生长,活力受损不大. 目前常用的保护剂为二甲亚砜(dmso)和甘油,它们对细胞无毒性,分子量小,溶解度大,易穿透细胞.

毋舍娜2968大肠杆菌菌液可以直接做PCR吗 -
赖谢翠17232382806 ______ - 直接做模板效果不太好~~~ 菌液沸水浴半小时,然后马上放入-20℃冰箱冰冻20min,化冻后离心取上清作为模板.

毋舍娜2968手工法 革兰阴性菌总DNA提取模板做PCR 经验方法 -
赖谢翠17232382806 ______ 质粒的方法就溶液123的方法就可以了 DNA可以参考提取动物、植物DNA的方法 更快速的方法可以参考我们做菌落pcr的方法,这个方法是采用少量的菌作为模板 然后加入pcr反应液,在pcr高温预变性的过程中菌细胞壁会裂解掉,dna和质粒都释放到溶液中作为模板参与扩增. 如果你有96孔深板(1-2ml)以及排枪最好了,省事省时.牙签或者枪头挑菌挑一点点(只要沾到菌落就行,不要求大块,大块反而不好),96孔每孔加500ul培养液,挑96个,然后拿去摇菌,培养3-5小时,菌液就可以直接作为pcr的模板了. 只要引物好用,基本都可以扩出来的.我们鉴定阳性克隆都这样做, 你可以参考

毋舍娜2968为什么大肠杆菌菌液可以直接PCR, 不需要先破坏细胞壁么? -
赖谢翠17232382806 ______ 94或95度这一步能破壁,从而进入PCR的循环

毋舍娜2968菌液PCR需要先将菌体离心吗 -
赖谢翠17232382806 ______ 不需要,沸煮5-10分钟就可以,如果还想简单,直接取1-2微升菌液进行PCR即可.

毋舍娜2968大肠杆菌可以直接做PCR吗 -
赖谢翠17232382806 ______ 可以直接做的,就是菌落PCR,不需要提质粒. 我才做过的.

毋舍娜2968real - time PCR可以直接以细菌的DNA为模板进行定量分析吗?还是real - time PCR 是针对RNA的啊? -
赖谢翠17232382806 ______ 当然可以. real time PCR最终是对PCR的模板做定量,只是现在较多用于基因表达差异比较与分析,也就是mRNA的定量(RT-qPCR),所以给生手的影响是用于RNA.但要注意的是,即使是mRNA,也有逆转录的过程,也就是先逆转录cDNA,这才是rt-pcr真正意义的模板,分析的是cDNA的量,进而反应mRNA的量. 直接用DNA来做,那就更可以了,反应的是模板DNA量的差异.比如对某些DNA病毒,就可以直接以病毒DNA为模板来RT-pcr,你用菌的DNA有何不可.

毋舍娜2968RT和qPCR可以是一个引物吗 -
赖谢翠17232382806 ______ qrt pcr一般指以rna为模板,先逆转成cdna,再进行qpcr 而qpcr一般是泛指,既可以当它是qrtpcr,也可以指他是专门定量检测dna的 比如检测细菌的16s,那不需要做rt,直接用qpcr检测定量即可.

毋舍娜2968真菌能做菌落pcr吗? -
赖谢翠17232382806 ______ 酵母的话,是可以做菌落PCR,跟细菌相似.如果是丝状真菌的话,建议还是提一下DNA吧.真菌鉴定目前常用的ITS序列,如果是单菌的DNA的话,用ITS1,ITS4一般就能扩增出来.PCR体系的话,常规的PCR体系就行,也能扩出来.

毋舍娜2968一个qpcr反应中是不是只需要一个探针引物就可以了 -
赖谢翠17232382806 ______ 一个qpcr反应中是不是只需要一个探针引物就可以了 一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2*的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以.由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于...