pcr溶解曲线峰太低

程凝于3326qPCR融解曲线的峰高由什么决定?相同的引物有一模板峰高与其他不同, -
支萧哄13332764416 ______[答案] Tm值相同,而峰高低有差异是表达丰度不同,同样的扩增产物也会出现Tm值有微小差异,一般差异在1度以内都可以接受.融解曲线的纵坐标表示荧光信号对温度的一阶负导数.

程凝于3326请问实时定量PCR的绘制溶解曲线应该从多少度开始升温?我的实验结果里,溶解曲线在55度时候有个小峰,请问可能是什么原因造成的? -
支萧哄13332764416 ______[答案] 如果扩增产物只有目标序列的话就应该只有一个峰的.1.简单的说来,溶解曲线就是在采用荧光染料法进行实时定量PCR时采用的一种分析手段.当体系的温度逐渐升高的时候,体系中的PCR产物慢慢的由双链变成单链,这是一个逐渐...

程凝于3326荧光定量PCR的几个问题 -
支萧哄13332764416 ______ 通过你的描述目前还有很多信息不实很了解:目的片段长度?pcr反应条件?管家基因的溶解曲线怎么样?做的什么实验?是否将产物跑了电泳,条带怎么样?你可以将上述问题整理一下在一些专业性较强的生物论坛发帖子让其他大神帮你分析一下.比如丁香园、生物秀等等. 出现怪异的溶解曲线大部分都是机器设置或者反应体系的问题,建议: 1、将扩增产物跑一下电泳,看一下目的条带亮不亮 2、一般定量pcr扩增后目的片段的峰在80~90℃之间,反应条件确认一下设置是否有问题 3、适当增加模板量或者减少引物浓度. 4、用的是哪个公司的酶?问一下这个公司的技术支持

程凝于3326运用pcr溶解曲线分析怎样计算结果 -
支萧哄13332764416 ______ 如果有标准曲线,按照标准曲线计算. 一般都是相对量.则用delta delta CT方法来计算.举例如下: 对照组基因A的CT值为20, 内参(比如βactin)CT值15.实验组基因A CT值18,内参CT值14. 首先算加样量:delta CT=15-14=1.2的1次方是2.也就是说.

程凝于3326荧光定量pcr溶解曲线为什么会有一个急剧的上升连着急剧下降,形成一个峰. -
支萧哄13332764416 ______ 随着温度升高,当温度达到Tm值时候,DNA就会变性分成单链的,此时荧光染料不能结合NDA所以检测的荧光型号越来越弱. 你说的出现的峰是荧光性号对温度求导后得到的曲线图,出现峰是因为在接近Tm值的位置荧光性号下降的斜率很快导致在对温度求导后出现峰. 出现单峰说明没有非特异性的结合和引物二聚体的产生.

程凝于3326realtime PCR的溶解曲线只有一个峰为什么会有二条带? -
支萧哄13332764416 ______ 一个峰不会出现2条带 可能是另一个峰很不明显 我遇到过很细微的峰也能跑出带来 你再检查下溶解曲线

程凝于3326实时定量PCR的绘制溶解曲线应该从多少度开始升温 -
支萧哄13332764416 ______ 如果扩增产物只有目标序列的话就应该只有一个峰的. 1.简单的说来,溶解曲线就是在采用荧光染料法进行实时定量PCR时采用的一种分析手段.当体系的温度逐渐升高的时候,体系中的PCR产物慢慢的由双链变成单链,这是一个逐渐变化的...

程凝于3326最近做荧光定量PCR实验,浓度梯度之间的CT值相差还不到1,这是什么原因?小弟初次做这实验,不太了解,请 -
支萧哄13332764416 ______ CT值与浓度之间不是相差1的关系,而是一种线性关系.要根据你的CT 和浓度的关系来确定.

程凝于3326做Realtime PCR时同样的复孔溶解曲线有的单峰特异,有的多峰Realtime PCR第一次做溶解曲线都是好的,后来同样的引物同样的条件和cDNA结果出来的... -
支萧哄13332764416 ______[答案] 可能是cDNA降解,也有可能你检测的片段表达量低,也有可能pcr mix有问题 建议多做几个复孔,选取其中的数据,或者重新设计引物

程凝于3326定量PCR试验,模板、引物都一样,只是mix分别用2家公司的,熔解曲线都是单峰,但峰值却相差2 - 3度,为什么 -
支萧哄13332764416 ______[答案] mix中镁离子含量、缓冲液组成等等都是可以影响到溶解曲线出峰值的.这个和Tm的影响方式差不多.